秦燕勤，吴耀松，李建生，陈玉龙，毛筱宁，赵丹瑞

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    调补肺肾三方对香烟烟雾提取物和脂多糖刺激人中性粒细胞释放活性氧及弹性蛋白酶的影响

    秦燕勤，吴耀松，李建生，陈玉龙，毛筱宁，赵丹瑞

    目的 分析调补肺肾(补肺益肾、补肺健脾、益气滋肾)三方对香烟烟雾提取物(CSE)和脂多糖(LSP)刺激人中性粒细胞释放活性氧(ROS)及弹性蛋白酶(NE)的影响。方法 2014年9月—2015年12月，将常规饲养1周的普通级日本大耳白兔96只按照随机数字表法分为正常组、补肺益肾组、补肺健脾组、益气滋肾组，24只/组。补肺益肾组、补肺健脾组、益气滋肾组大耳白兔分别采用补肺益肾方剂、补肺健脾方剂、益气滋肾方剂灌胃，正常组采用等量的0.9%氯化钠溶液灌胃，4组均于第7次灌胃后取腹主动脉血，分离血清，-70 ℃保存备用。取来自河南中医药大学健康成年男性(年龄20～25岁)志愿者外周血，分离人中性粒细胞。CSE刺激下，将人中性粒细胞分为正常对照组(加20%的正常组兔血清)，CSE模型组(加20%的正常组兔血清+10% CSE)，补肺益肾血清组、补肺健脾血清组、益气滋肾血清组(分别添加20%相应的含药兔血清+10% CSE)。LPS刺激下，将人中性粒细胞分为正常对照组(加20%的正常组兔血清)，LPS模型组(加20%的正常组兔血清+2 μg/ml LPS)，补肺益肾血清组、补肺健脾血清组、益气滋肾血清组(分别添加20%相应的含药兔血清+2 μg/ml LPS)。分别采用流式细胞仪和酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组ROS活性、NE水平。结果 与正常对照组比较，CSE模型组、LPS模型组ROS活性增强，NE水平升高(P1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验药物 补肺益肾方由人参9 g、山茱萸12 g、五味子9 g、陈皮9 g等组成；补肺健脾方由党参15 g、白术12 g、茯苓12 g、炙甘草6 g等组成；益气滋肾方由人参9 g、枸杞子12 g、麦冬15 g、炙甘草6 g等组成。药物均由河南中医药大学第一临床医学院中药制剂与剂型改革基地提供。

    1.1.2 主要试剂及仪器 LPS(美国Sigma公司)；RPMI 1640培养基、人外周血中性粒细胞分离液试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；活性氧检测试剂盒(南京凯基生物公司)；人抗中性粒细胞弹性蛋白酶抗体(ANEA)酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒(Elabscience公司，E-EL-H0383c)。BD FACSCalibur流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)；全自动酶标仪ELx800(美国BIO-TEK宝特) ......