崔青松，朴红梅，崔晶刚，王富佳，安昌善

    ·论著·

    肝细胞生长因子诱导敏感非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药及机制研究

    崔青松，朴红梅，崔晶刚，王富佳，安昌善*

    目的 研究肝细胞生长因子(HGF)诱导敏感非小细胞肺癌(NSCLC)细胞对厄洛替尼耐药的机制，观察c-Met及其下游信号通道蛋白是否参与HGF诱导不同基因型NSCLC细胞对厄洛替尼耐药。方法 2014年1月—2015年1月，选择人NSCLC细胞株PC-9〔表皮生长因子受体(EGFR)突变型，敏感株〕、H292(EGFR野生型，敏感株)及人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞，通过ELISA法检测PC-9、H292、MRC-5细胞培养上清液中HGF水平。用MRC-5细胞培养上清液诱导PC-9、H292细胞，采用Western blotting法检测c-Met及其下游通道蛋白表达情况。将56只雌性、SPF级BALB/c裸鼠随机分为8组，每组7只。在PC-9细胞诱导模型中，对照组(C组)和厄洛替尼处理组(E组)裸鼠皮下接种PC-9细胞悬液，MRC-5诱导组(H组)、MRC-5和厄洛替尼处理组(HE组)裸鼠皮下接种PC-9+MRC-5细胞悬液；当移植瘤直径达到4 mm时，C组和H组采用0.9%氯化钠溶液灌胃，E组和HE组采用厄洛替尼灌胃。在H292细胞诱导模型中，C组、E组裸鼠皮下接种H292细胞悬液，H组、HE组裸鼠皮下接种H292+MRC-5细胞悬液；模型建立后灌胃方式同PC-9细胞诱导模型。给药结束后处死裸鼠，比较PC-9、H292细胞诱导模型中各组移植瘤重量。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织中c-Met及其下游通道蛋白表达水平。结果 PC-9、H292细胞培养上清液中均未检测到HGF，MRC-5细胞培养上清液中HGF水平为(1 262±90)pg/ml。Western blotting法结果显示，MRC-5细胞培养上清液中HGF能活化PC-9、H292细胞中p-Met、p-Akt、p-Stat3、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-Erk1/2)活性。PC-9细胞诱导模型中：E组移植瘤重量小于C组(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 人NSCLC细胞株PC-9(EGFR突变型，敏感株)、H292(EGFR野生型，敏感株)由同济大学附属上海肺科医院中心实验室提供；人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞购自上海生命科学院细胞库；56只雌性、4周龄、SPF级BALB/c裸鼠购自上海市斯莱克实验动物有限公司，许可证号SCXK(沪)2003-0003，放在标准塑料盒中由专职饲养员负责饲养；盐酸厄洛替尼原料购自大连美仑生物技术有限公司；Human HGF ELISA试剂盒购自美国R&D Systems公司 ......