刘 羽，李兆星，檀碧波，范立侨，赵 群，张 萌，徐志彬，李 勇*

    ·方法学研究·

    应用基于色谱质谱联用技术的蛋白质组学鉴定筛选胃癌相关蛋白质

    刘 羽1，李兆星1，檀碧波1，范立侨1，赵 群1，张 萌2，徐志彬3，李 勇1*

    目的 应用基于色谱质谱联用技术(LC-MS)的蛋白质组学鉴定筛选胃癌相关蛋白质，并初步探讨其功能。方法 选取2011年4月—2012年9月于河北医科大学第四医院确诊为胃腺癌并进行手术切除者16例为研究对象。术中取患者胃癌组织及癌旁正常组织，采用基于LC-MS的蛋白质组学鉴定筛选胃癌组织及癌旁正常组织中的差异蛋白质，并应用免疫组化染色法验证筛选出的差异蛋白质。结果 基于LC-MS的蛋白质组学鉴定结果显示，胃癌组织与癌旁正常组织均鉴定了3 000～4 000种蛋白质，其中12种蛋白质差异显著，将其与GO数据库进行对比，去除二级节点中归类为“细胞组分”的结构蛋白质，在“分子功能”和“代谢过程”这两个节点中找到了4种可能与胃癌有关的蛋白质，即谷胱甘肽巯基转移酶-π-1(GST-π-1)、铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、丙酮酸激酶M2(PK-M2)、P120连环蛋白(P120-ctn)。免疫组化染色结果显示，胃癌组织中GST-π-1、PK-M2、P120-ctn阳性率大于癌旁正常组织，Cu/Zn-SOD阳性率小于癌旁正常组织(P1 材料与方法

    1.1 研究材料

    1.1.1 组织标本来源 选取2011年4月—2012年9月于河北医科大学第四医院确诊为胃腺癌并进行手术切除者16例为研究对象。其中男9例，女7例；年龄51～72岁，平均年龄(59.2±10.6)岁。纳入标准：(1)确诊为胃癌，手术切除肿瘤，病理为胃腺癌；(2)术前未接受过放化疗等治疗。排除标准：(1)术后复发或合并其他恶性肿瘤者；(2)长期应用激素或免疫抑制剂者；(3)不同意参加研究者。术中取患者胃癌组织及癌旁正常组织各1.0 cm×0.5 cm×1.0 cm。标本一式两份，一份置于-80 ℃保存用于蛋白质组学鉴定；另一份以中性甲醛固定，用于免疫组化检测。

    1.1.2 主要试剂与仪器 胰蛋白酶(美国Promega公司)，盐酸胍(美国Sigma公司)，二硫苏糖醇(华美生物工程有限公司)，碘乙酰胺(美国EMD Chemicals公司)，乙腈(美国Thermo Fisher Scientific公司)，所有抗体及免疫组化试剂盒(美国Santa Cruz公司)，液质联用仪(LTQ XL型，美国Thermo Fisher Scientific公司) ......