纪 昕，王 鑫，岳晓乐，赵丹丹，郭玉楷，李永军

    ·论著·

    eNOS、CAV1、PI3K/Akt信号通路在同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞迁移、增殖中的作用研究

    纪 昕，王 鑫，岳晓乐，赵丹丹，郭玉楷，李永军*

    目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小凹蛋白-1(CAV1)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在同型半胱氨酸(Hcy)促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移、增殖中的作用。方法 2016年1—6月采用组织贴块法分离SDF级SD大鼠胸主动脉中膜并传代培养VSMCs，取4～7代细胞用于实验。细胞分为4组，分别为空白对照组、100 μmol/L Hcy组、200 μmol/L Hcy组、500 μmol/L Hcy组，使用相应浓度Hcy(0、100、200、500 μmol/L)进行干预培养，采用Transwell法检测VSMCs迁移能力、MTT法检测VSMCs增殖情况〔以光密度(OD)值表示〕，硝酸还原酶法测定VSMCs 释放NO情况，Western blotting检测VSMCs eNOS、CAV1、PI3K、p-Akt蛋白表达情况。结果 VSMCs穿膜细胞数与Hcy浓度呈正相关(r=0.582,P=0.020)。OD值与Hcy浓度呈正相关(r=0.620,P=0.015)。100、200、500 μmol/L Hcy组释放NO低于空白对照组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及试剂 2016年1—6月选取SPF级SD大鼠6只，8周龄，体质量200～250 g，雄性，由河北医科大学实验动物中心提供，动物健康状况良好，饲养于河北医科大学实验动物中心SPF级实验室，饲养温度25 ℃，相对湿度70%，昼夜照明12 h/12 h。Hcy、四唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、抗PI3K抗体购自美国Sigma公司，抗eNOS单克隆抗体、抗CAV1多克隆抗体购自美国Introgen Therapeutics公司，抗p-Akt抗体购自美国Bioworld公司，Western blotting试剂盒购自南京碧波生物科技有限公司，一氧化氮(NO)测试盒(硝酸还原酶法)购自南京建成生物工程研究所，DMEM培养液、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)购自美国GIBCO公司。

    1.2 SD大鼠VSMCs分离、培养 采用随机抽样法将SD大鼠分为3批，每批2只，每批饲养1周后处死，所有实验重复3次。每批实验采用颈椎脱臼法处死2只SD大鼠，打开胸腔找出胸主动脉；分离血管周围结缔组织 ......