汤国辉，张志伟，黄卫国，谢运杰，刑佼涛，贺修胜*

    ·论著·

    miR-142-3p通过靶向CD133抑制鼻咽癌细胞和鼻咽癌干细胞生长的效果研究

    汤国辉1，张志伟2，黄卫国2，谢运杰2，刑佼涛1，贺修胜2*

    目的 明确miR-142-3p能否通过靶向CD133的表达进而抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力，探讨miR-142-3p在抑制肿瘤生长中的分子机制。方法 于2015年7月—2016年9月，构建CD133mRNA 3′-UTR荧光素酶报告载体，通过荧光素酶报告系统观察miR-142-3p对CD133mRNA 3′-UTR荧光素酶活性的影响。将对照control、CD133siRNA及miR-142-3p模拟物各40 μmol/L分别转染至鼻咽癌CNE2细胞，采用Western blotting法检测其对CD133表达水平的影响；设立阴性对照组〔瞬时转染对照control(40 μmol/L)〕、阳性对照组〔瞬时转染CD133siRNA(40 μmol/L)〕、miR-142-3p组〔瞬时转染miR-142-3p模拟物(40 μmol/L)〕、联合组〔瞬时共转染miR-142-3p模拟物(40 μmol/L)和pcDNA3.1(+)-CD1330.8 μg〕，MTS法检测4组对CNE2细胞增殖活性的影响，Transwell法检测4组对CNE2细胞侵袭能力的影响，干细胞成球实验检测阴性对照组和miR-142-3p组对CNE2干细胞成球能力的影响。结果 单光子荧光素酶活性检测结果显示，无miR-142-3p转染的pCD133-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.924±0.107)，miR-142-3p转染的pCD133-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.535±0.035)，两者比较，差异有统计学意义(t=7.924，P=0.022)。Western blotting法检测结果显示，阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组CD133表达水平比较，差异有统计学意义(F=12.44，P1 材料与方法

    1.1 主要材料 实验于2015年7月—2016年9月进行。鼻咽癌CNE2细胞为人恶性鼻咽癌细胞，来自南华大学肿瘤研究所。miR-142-3p模拟物和阴性对照control为美国Ambion公司产品。CD133小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)由美国Invitorgen公司合成。鼠抗人CD133抗体和β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司，MTS细胞增殖/毒性检测试剂盒购自Promega公司 ......