刘殿刚，张育先，张若蹊，张 超，李 非，王 宇

    ·论著·

    Palosuran改善四氯化碳肝硬化模型大鼠肝纤维化的机制研究

    刘殿刚1*，张育先2，张若蹊1，张 超1，李 非1，王 宇3

    目的 探究尾加压素Ⅱ(UⅡ)受体拮抗剂Palosuran对四氯化碳(CCl4)肝硬化模型大鼠肝纤维化的改善作用。方法 2015年1—12月，将32只SPF/VAF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组、4周模型组、8周模型组、治疗组，各8只。4周模型组、8周模型组分别腹腔注射0.2 ml/100 g CCl4溶液(分别连续4周、8周)建造肝硬化模型，造模后分别处死；对照组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液(连续8周)，结束注射后处死；治疗组腹腔注射等量CCl4溶液(连续4周)建造肝硬化模型，之后改为Palosuran灌胃(4周),第8周末处死。取各组肝组织进行天狼猩红染色，观察各组肝组织病理组织学变化、统计肝纤维化半定量计分；检测各组肝组织羟脯氨酸(Hyp)水平；采用RT-qPCR检测各组肝组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA表达水平；采用ELISA检测各组血清ColⅠ水平；采用免疫组化法检测各组肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞计数。结果 对照组仅在肝内汇管区及静脉壁周围可见胶原沉积；4周模型组可见肝脏结构紊乱、纤维组织增生、假小叶形成；8周模型组可见肝小叶结构破坏，纤维组织增生明显，将肝小叶分隔成大小不等的肝细胞团，肝细胞索排列弥漫，中央静脉周围带大片肝细胞气球样肿胀，胞质疏松淡染，肝窦受压变窄；治疗组纤维间隔细小，增生的纤维组织明显减少。治疗组肝纤维化半定量计分〔(8.6±2.5)分〕低于8周模型组〔(16.1±2.2)分〕(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 SPF/VAF级雄性Wistar大鼠32只，平均体质量(220.0±12.5)g(北京维通利华实验动物技术有限公司)。Palosuran由瑞士Actelion公司惠赠，分子量516.6；CCl4含量>99.5%(北京化工厂)；UⅡ ELISA试剂盒(美国Phoneix公司)；反转录酶、RNA抑制酶、Oligo(dT)(美国Promega公司)；qPCR试剂盒(日本TakaRa公司)；小鼠抗大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单抗(美国Sigma公司)；大鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒(武汉中美科技有限公司)；A030-2羟脯氨酸(Hyp)测试盒(南京建成生物工程研究所)；小鼠抗大鼠α-SMA单抗(美国Sigma公司)；即用型第二代免疫组化Elivision plus(福州脉新生物技术开发有限公司) ......