李椿莹，文 彬，李福英，邓 鑫*

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    肝宁方对肝细胞内质网应激相关分子GRP78蛋白及其mRNA表达的影响

    李椿莹1，文 彬2，李福英1，邓 鑫2*

    目的 探讨肝宁方对肝细胞内质网应激(ERS)相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白及其mRNA表达的调控作用及临床意义。方法 本研究时间为2015年10月—2016年7月。SPF级SD健康大鼠20只用于制备肝宁方血清；衣霉素溶于DMSO溶液，完全溶解后加入含有胎牛血清的培养液制备衣霉素培养液。将HL-7702肝细胞分为正常对照组、ERS模型组、肝宁方治疗组。正常对照组予正常培养液培养，ERS模型组予衣霉素培养液培养，肝宁方治疗组予含肝宁方血清的衣霉素培养液培养。采用qRT-PCR测定各组肝细胞ERS中GRP78 mRNA表达水平及Western blotting法检测相应蛋白的表达水平。结果 ERS模型组肝细胞GRP78 mRNA表达水平高于正常对照组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 本研究时间为2015年10月—2016年7月。SPF级SD健康大鼠20只，6～7周龄，雄性，体质量(180±20)g，购自广西医科大学动物实验中心，动物合格证：scxk 桂2015-0008，置于恒温(25 ℃)，湿度50%的环境中饲养。

    1.2 主要试剂及仪器 Trizol试剂(北京百奥森泰生物技术有限公司)，RNA提取试剂盒(美国Sigma公司)，四季青胎牛血清(北京索莱宝科技有限公司)，RPMI-1640培养基(美国Gibco公司)，青链霉素混合液(北京索莱宝科技有限公司)，DMSO试剂(美国Amresco公司)，DEPC处理水(上海碧云天生物技术有限公司)，0.25%胰酶及2 mg/ml Ⅰ型胶原酶(北京索莱宝生物科技有限公司)，肝宁方(广西中医/民族医药研发基地)，衣霉素(美国Sigma 公司)，反转录试剂盒及SYBR Green荧光定量染料法试剂盒(美国Thermo fisher 公司)，GRP78多克隆抗体(Abcam美国公司)，β-actin 多克隆抗体(美国Santa Cruz 公司)，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。电泳仪及电转仪(美国伯乐公司)，0-2PE型荧光倒置显微镜(日本OLYMPUS 公司)，3-16K高速冷冻离心机(美国Sigma 公司)，PCR扩增仪(德国Eppendoff公司)。

    1.3 药物制备

    1.3.1 完全培养液配制 每100 ml的RPMI-1640培养基中加入10%胎牛血清、1%的青链霉素混合液 ......