加杨娥，任立汆，燕华玲

    ·论著·

    黑枸杞水提物对中波紫外线辐射后人角质形成细胞增殖与凋亡及凋亡相关蛋白表达水平的影响研究

    加杨娥，任立汆，燕华玲*

    目的研究黑枸杞水提物对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成(HaCaT)细胞增殖与凋亡及凋亡相关蛋白〔P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、P53、半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)〕表达水平的影响，以期探讨黑枸杞水提物减轻UVB损伤HaCaT细胞的作用机制。方法2015年3月—2016年1月，提取黑枸杞水提物，体外培养HaCaT细胞，取对数生长期的HaCaT细胞，采用随机数字表法分为对照组(无辐射)、UVB组(30 mJ/cm2UVB辐射40 min)、黑枸杞水提物组(30 mJ/cm2UVB辐射40 min+黑枸杞水提物2 mg/ml)。采用MTS法检测各组细胞增殖活力，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3、Bcl-2表达水平。结果UVB组细胞增殖活力小于对照组(P1 材料与方法

    1.1 材料和仪器 黑枸杞干果购自青海德令哈市壹叶香茶行；HaCaT细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司；DMEM培养基和10%胎牛血清(FBS)购自Gibco公司；金属硫蛋白混合体(MTS)购自Promega公司；RIPA裂解液购自碧云天生物技术研究所；十二烷基硫酸钠-聚丙基酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶制备试剂盒购自Biosharp公司；一抗(抗P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3、Bcl-2、β-actin抗体)购自Abcam公司；二抗(山羊抗兔抗体)购自Proteintech公司；发光液购自Thermo Fisher Scientific公司；BCA试剂盒购自南京建成生物科技有限公司；Bio-Rad酶标仪(X-Mark型)购自Bio-Rad公司。

    1.2 黑枸杞水提物的提取 准确称取黑枸杞干果100 g，加入蒸馏水500 ml，煮沸2 h，每15 min搅拌1次，过滤，滤渣中加入同样的蒸馏水继续煮沸，重复3次，合并滤液，旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥获得黑枸杞水提物粉末。以含10% FBS的DMEM培养基为溶剂，配制成2 mg/ml的黑枸杞水提物溶液，用0.22 μm孔径的过滤器过滤，现配现用。

    1.3 HaCaT细胞的培养 向装有HaCaT细胞的培养瓶中加入含有10% FBS和1%双抗(链霉素和青霉素)的DMEM培养基 ......