宋军营，袁 永，王丛笑，张钟允，宫洪涛，张振强*，刘文弟，高爱社

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    六味地黄丸含药血清对β-淀粉样蛋白损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的保护作用研究

    宋军营1，袁 永1，王丛笑2，张钟允1，宫洪涛3，张振强1*，刘文弟1，高爱社4

    目的研究六味地黄丸含药血清(MSLDP)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的保护作用，探讨六味地黄丸在防治阿尔茨海默病(AD)中的作用机制。方法2012年3月—2013年4月选取SPF级雄性SD大鼠20只，按照随机数字表法将20只雄性SD大鼠分为对照组、给药组，每组10只。制备MSLDP及Aβ25-35母液备用。根据Aβ25-35、MSLDP不同干预浓度将处于对数生长期PC12细胞分为0、10、20、40 μmol/LAβ25-35组和0%、2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、30.0%MSLDP组，另取处于对数生长期PC12细胞分为正常对照组(不加Aβ25-35和MSLDP)、模型组(加入20 μmol/L Aβ25-35制备AD模型)、MSLDP干预组(加入20% MSLDP+20 μmol/L Aβ25-35)，显微镜下观察0%、2.5%、5.0%、10.0%、20.0%、30.0%MSLDP组及正常对照组、模型组、MSLDP干预组PC12细胞形态。采用 MTT法检测PC12细胞存活率，同上分组方法及步骤采用Western blotting法检测 PC12细胞血管内皮生长因子B(VEGF-B)蛋白表达水平。结果0 μmol/L Aβ25-35组PC12细胞存活率高于10、20、40 μmol/L Aβ25-35组(P1 材料与方法

    1.1 研究时间 2012年3月—2013年4月。

    1.2 实验材料 PC12细胞，由昆明理工大学医学部白洁教授赠予。SPF级雄性SD大鼠20只，周龄 12周，平均体质量(250±20)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司〔SCXK(京)2012-0001〕。六味地黄丸浓缩丸(河南省宛西制药股份有限公司，批号110316)。

    1.3 主要试剂及仪器 VEGF-B (美国Epitomics公司)，β-actin(北京中杉金桥生物技术有限公司)，Aβ25-35(美国SIGMA公司)，山羊抗小鼠(北京中杉金桥生物技术有限公司)，MTT(北京索莱宝科技有限公司)，倒置显微镜〔尼康映像仪器销售(中国)有限公司〕，多功能全波长酶标仪(美国Molecular Devices公司) ......