王一茗，张新昕，束彦页

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    穴位埋线对缺血再灌注损伤高脂血症合并2型糖尿病大鼠心肌保护作用的机制研究

    王一茗1*，张新昕2，束彦页1

    目的探讨穴位埋线对缺血再灌注损伤高脂血症合并2型糖尿病(ZDF)大鼠心肌保护作用的机制，为临床治疗提供理论依据。方法2015年1月—2016年5月选取ZDF大鼠24只，随机分为对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组和穴位埋线组，每组6只。适应性饲养1周后第7天，对照组直接开胸取材，其余3组均结扎冠状动脉左前降支，建立缺血再灌注损伤模型。缺血再灌注组缺血30 min，再灌注60 min；缺血预处理组缺血5 min、再灌注5 min，重复3次，之后操作同缺血再灌注组；穴位埋线组在适应性饲养1周后第1天，“内关”“膻中”“心俞”穴进行穴位埋线，之后操作同缺血再灌注组。采用透射电镜观察各组ZDF大鼠心肌组织超微结构及自噬水平，Western blotting法检测心肌内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、自噬相关蛋白Beclin-1水平，酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)水平。结果透射电镜下对照组线粒体和心肌细胞形态结构正常，未见明显自噬体；缺血再灌注组线粒体和心肌细胞肿胀明显，细胞膜破裂、内容物泄漏，仅见空泡或空腔及少量自噬泡；缺血预处理组、穴位埋线组与缺血再灌注组相比，心肌细胞超微结构损伤较轻，且自噬泡数量明显增多；缺血再灌注组心肌细胞超微结构破坏最为严重，且未见明显自噬泡。缺血再灌注组、缺血预处理组、穴位埋线组GRP78、Beclin-1、MPO、MDA水平高于对照组(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂 Beclin-1、GRP78(Abcam公司)；髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛 (MDA)试剂盒(DECQ上海慧颖生物科技公司)，其余试剂(如Tris-base、Tween-20、Western专用脱脂奶粉、过硫酸铵粉、甘氨酸G7126、SDS粉末、甲醇、甲叉双丙烯酰胺、TEMED、Western bloting及缺血预处理裂解液、PMSF、20XTBS、PVDF膜等)购自Sigma公司，实验动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供〔动物许可证编号SCXK(京)2012-0001〕。

    1.2 实验分组及模型制备 研究时间：2015年1月—2016年5月。

    SPF级雄性高脂血症合并2型糖尿病(ZDF)大鼠24只，8周龄，体质量220～230 g，在SPF级实验环境适应性饲养1周 ......