周涛，朱美意，周杰，曹东，欧阳军

    随着现代工业和交通业的迅猛发展，各类事故所致腹部闭合性损伤日渐增多，而腹部创伤中肝损伤较常见，占腹部创伤发生率>20%[1]。严重肝损伤的伤情复杂，并发症多，病死率为10%[2]。目前对肝损伤的研究主要集中在免疫性、化学性肝损伤，而对机械性肝损伤的研究相对较少。神经突蛋白(Neuritin)作为神经营养因子在多个器官表达，其在肝损伤及修复过程中的变化及作用尚未被研究。因此本研究建立大鼠肝损伤模型，采用免疫组化法观察肝损伤后不同时间点肝组织Neuritin水平，以初步探讨Neuritin在肝损伤修复过程中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 Neuritin免疫组化一抗为多克隆山羊抗体(型号AF283)，购于美国R&D公司，相应二抗(型号：PV-9003)购于北京中杉金桥生物技术有限公司，10%水合氯醛购于MERCK，肝素购于南京化学试剂股份有限公司。

    1.2 仪器与设备 自制改良型BIM-IV生物撞击机购于第三军医大学；Sartorius电子天平(型号：PRACTUM124-1CN)购自深圳市盛美仪器有限公司；鼠板由本院实验室提供。

    1.3 实验动物、分组及造模

    1.3.1 实验动物、分组 清洁级SD大鼠126只，由新疆医科大学动物饲养中心〔许可证号XJZZQ(XK)200301〕提供，6周龄，雌雄不限，体质量(200±20)g。2015年11月—2016年11月，采用随机数字表法将SD大鼠分为空白组(42只)、非肝损伤组(42只)、肝损伤组(42只)。

    1.3.2 造模 各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3 ml/kg)麻醉，取仰卧位固定于鼠板。肝损伤组采用自制改良型BIM-IV生物撞击机建立肝损伤模型：将大鼠右侧腹部置于自制改良型BIM-IV生物撞击机打击头下，对其剑突与右肋弓夹角处行2次打击致肝脏钝性撞击破裂伤，肝损伤造模成功与否根据美国创伤外科协会(AAST)肝损伤分级标准[3]评判；非肝损伤组大鼠于同一部位给予同一力度致其股骨骨折；空白组不给予任何处置。

    1.4 标本采集 分别于造模后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d采用随机数字表法在各组选取7只大鼠，处死大鼠，完整取下损伤肝组织并使用Sartorius电子天平测量其重量，10%甲醛溶液固定，常规包埋、切片。从股动脉处取静脉血l～2 ml并肝素化，室温静置30 min，3 000 r/min离心10 min(离心半径3 cm)，取血清、分装并于4 ℃保存待用 ......