贺继刚，韩金秀，李贝贝，李宏远，严丹，任靖宇*

    本研究背景：

    冠心病位居世界人口死亡原因首位。目前国内外对冠心病的治疗主要分为：外科治疗、内科治疗及细胞治疗。细胞治疗中应用最为成熟的是骨髓间充质干细胞(BMSCs)，虽然已有大量文献证实BMSCs可以改善心肌梗死后心功能。但干细胞临床应用尚不成熟，而GATA-4是调控心脏基因表达的重要转录因子。目前已经证明过表达GATA-4的BMSCs可以通过促进BMSCs向心肌细胞分化，从而有效改善心肌梗死后心功能。然而转染基因干细胞的致瘤性使干细胞的临床应用前景遥遥无期。有什么可以让细胞修复的优势凸显，而同时又可以规避其风险呢？本研究将目光聚焦于细胞分泌的外泌体。外泌体是从细胞上产生的鳞片状脱落的囊泡，具有多种生物学功能，可以使细胞在不需要直接接触下完成细胞间生物信号的传导，其在细胞保护、免疫、疾病诊断等方面成为目前研究的热点。基于此，本研究采用过表达GATA-4的小鼠BMSCs分泌的外泌体，证明其可以充分有效促进BMSCs向心肌细胞分化。

    冠心病引起的心肌梗死(即心肌损伤)已成为目前世界范围内的头号“杀手”。据世界卫生组织(WHO)统计：2000—2012年冠心病位居世界人口死亡原因首位[1-2]。目前干细胞治疗成为研究热点，尤其是骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，虽然已有大量文献证实BMSCs可以改善心肌梗死后心功能[3]。但亦有更多的学者提出，干细胞应用临床尚不成熟，主要原因在于BMSCs安全性一直受到广泛怀疑[4]。本课题组前期研究已经证明过表达GATA-4可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化[5]。在此研究基础上，本课题组将目光进一步聚焦于细胞分泌的外泌体。外泌体具有多种生物学功能，可以使细胞在不需要直接接触下完成细胞间生物信号转导。本研究利用慢病毒携带GATA-4转染小鼠BMSCs并提取分泌的外泌体，通过与BMSCs共培养后采用免疫荧光、反转录聚合酶链式反应(qPCR)证明过表达GATA-4的小鼠BMSCs分泌的外泌体可以有效促进BMSCs向心肌细胞分化。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 2016年1—6月选取健康4周龄SPF级C57BL/6小鼠10只，均为雄性，体质量20～25 g，由成都达硕实验动物有限公司提供，动物许可证号为SCXK(川)2015-030。

    1.2 主要试剂和仪器 C57BL/6小鼠BMSCs完全培养基(低糖培养基，含10%胎牛血清)购自美国Cyagen Biosciences公司 ......