王一茗，杨晓月，张新昕

    急性心肌梗死(AMI)是全球范围内死亡及致残的主要原因之一[1]。对缺血心肌进行及时有效的再灌注，减少缺血带来的损伤及缩小梗死面积是临床治疗目标。然而，再灌注过程中可能引发缺血再灌注损伤(IRI)，细胞凋亡是IRI过程中的重要环节[2]。有研究显示，缺血预处理(IP)及其他预处理手段可发挥内源性保护作用，从而减轻由缺血再灌注对心肌造成的损伤[3-4]。YAN等[5]指出，IP与自噬有许多共同特征，自噬在IP减轻再灌注损伤且保护心肌方面具有重要作用。而细胞凋亡又与自噬关系密切，且存在交互效应，两者具有多个共同的调控元件，如Bcl-2、Bax、Caspase-3等。同时，多项研究均证实，针灸预处理可减轻缺血再灌注对心肌造成的损伤，对心肌具有保护作用[6-9]。本研究探讨中医学经典外治法穴位埋线对IRI后ZDF大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 2015年1月—2016年5月，选取SPF级雄性ZDF大鼠24只，8周龄，体质量220～230 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司〔许可证号：SCXK(京)2012-0001〕。本研究获得江苏大学附属医院生物医学研究伦理委员会批准。

    1.2 主要试剂及仪器 Tween-20、十二烷基硫酸钠(SDS)粉末(biotopped试剂公司)，Western专用脱脂奶粉(美国BD公司)，甲叉双丙烯酰胺(美国Sigma公司)，Western blotting、BeyoECL Plus及IP裂解液(上海碧云天生物技术有限公司)，Bcl-2、Bax及Caspase-3试剂盒(Abcam公司)，过氧化氢酶(CAT)及一氧化氮(NO)酶联免疫吸附试剂盒(上海慧颖生物科技公司)。冷冻离心机(德国适马股份有限公司)，SDS电泳仪和转膜仪、垂直凝胶电泳槽、凝胶成像系统(美国Bio-rad公司)，脱色摇床(沃德生物医学仪器公司)，全自动图像分析系统(上海TANON科技有限公司)。

    1.3 分组 采用随机数字表法，将ZDF大鼠分为4组，各6只。空白组常规饲养，不做任何处理。缺血再灌注组饲养7 d后缺血30 min，再灌注60 min。缺血预处理组饲养7 d后缺血5 min，再灌注5 min，反复3次后，缺血30 min，再灌注60 min。埋线预处理组第1天对内关、膻中、心俞穴进行埋线，7 d后缺血30 min，再灌注60 min。

    1.4 缺血再灌注方法 ZDF大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.4 ml/100 g)麻醉 ......