史会娟 ，薛健雄 ，石冬璇 ，孔令玉 ，李晶 *

    食管癌发病有明显的地域性差别，我国食管癌的发病率是世界平均发病率的2倍[1]。河北省磁县、涉县食管癌发病率和病死率均高居世界榜首[2]。而转移是导致食管癌患者死亡的主要原因。即使行食管癌根治术的患者约50%在术后2～3年仍会发生局部复发或远处器官转移[3]。我国食管癌患者的5年生存率仅为20.9%[4]。因此，寻求抑制食管癌转移的有效方法是目前的重要课题。

    本课题组长期从事食管癌防治研究，提出食管癌(噎膈)的核心病机是“血液衰耗，胃脘干槁”[5]。瘀血、痰阻、逆气只是其不同阶段派生的不同表现，而非噎膈之本质。尤其对于食管癌切除术后患者，只有彻底改变“血液衰耗，胃脘干槁”的状态，应用“甘润濡养”之法，从食管癌的本质着手，才能彻底抑制食管癌转移。本研究旨在探讨以“甘润濡养”立法的启膈方对尾静脉注射食管癌细胞裸鼠肺转移的影响，并探讨其作用机制，以期为以“甘润濡养”立法抑制食管癌肺转移提供更多基础实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞及实验动物 稳转Luciferase荧光素酶基因的人源性食管癌细胞株KYSE-150-Luc和荧光素酶底物购于上海科远迪生物科技有限公司；BABL/c裸鼠共21只，5周龄，体质量18～20 g，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2016-0011 NO.11400700208569，饲养于河北医科大学第四医院实验动物中心(SPF级)。

    1.1.2 主要仪器及试剂 动物活体成像系统(NightOWL)购于德国Berthold公司；RPMI 1640培养基购于美国GIBCO公司；胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司；胰蛋白酶购于美国GIBCO公司；二甲基亚砜(DMSO)购于北京索莱宝科技有限公司；启膈方药物购自河北省石家庄市乐仁堂总店，由石家庄以岭药业制成水提冻干粉保存；卡培他滨片(希罗达，0.5 g×12片)产自上海罗氏制药有限公司，产品批号SH2085。

    1.2 实验方法 本研究时间为2017年2—10月。

    1.2.1 药物制备 启膈方提取物(QGF)制备：郁金25 g，沙参25 g，丹参15 g，浮小麦5 g，浙贝10 g，茯苓10 g，砂仁10 g，荷叶5 g，清夏10 g，天冬25 g，山药25 g，为70 kg左右成人每人每日用量，采用水提法制备提取物冻干粉，约30 g。将冻干粉分装并储存于-80 ℃冰箱 ......