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编号:901470
罗氏全自动电化学发光免疫分析系统检测大小鼠甲状腺激素水平的实验研究
http://www.100md.com 2018年11月17日 中国全科医学 2018年第32期
实验性,1材料与方法,2结果,3讨论
     王红,王冉冉,赵得发,单忠艳,滕卫平,滕晓春

    甲状腺疾病是常见的内分泌疾病之一,其患病率高,发病机制复杂[1-2]。目前关于甲状腺疾病的基础研究越来越受到重视,检测血清甲状腺激素水平是评估机体甲状腺功能状态的常用方法,在基础研究中广泛应用。甲状腺激素水平的测定主要有两种方法:一是高效液相色谱串联质谱法,其结果最为可靠,是检测甲状腺激素的金标准,但是价格昂贵,很难在实际研究中推广;二是免疫法,包括放射免疫法、酶联免疫法、化学发光免疫分析法等。放射免疫法灵敏度高,但因其有放射性污染、试剂有效使用期短等缺点,正在逐渐被非同位素标记法代替。酶联免疫法测定啮齿类动物甲状腺激素水平技术不成熟,目前市售的针对大、小鼠甲状腺激素水平测定的酶联免疫试剂盒,由于其检测误差很大,不被学界认可。化学发光免疫分析法是人类甲状腺激素测定的主要方法,其具有速度快、重复性好等优点,但目前国际上并没有针对大、小鼠特异性的甲状腺激素水平测定的电化学发光试剂盒。本研究旨在探讨利用罗氏全自动化学发光免疫分析系统和人的甲状腺激素试剂盒检测大、小鼠血清甲状腺激素水平的稳定性、可靠性以及比较不同品系大、小鼠血清甲状腺激素水平的差异。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及血清制备 2016年11月—2017年3月,实验动物购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。在温度20~25 ℃和湿度40%~45%条件下喂养,每个饲养笼喂养3~4只鼠,光-暗周期为12 h,正常动物颗粒饲料与蒸馏水喂养10 d后进行后续实验。本研究获得中国医科大学附属第一医院医学科学研究伦理委员会批准。

    1.1.1 昆明小鼠和SD大鼠混合血清制备 选取7~8周龄昆明小鼠60只和SD大鼠30只,戊巴比妥钠(0.9%氯化钠溶液溶解浓度为3%,注射剂量1.5 ml/kg),腹腔注射麻醉,小鼠用EP管摘眼球取全血,大鼠用促凝管心尖负压取全血,室温静置2 h后,4 ℃冰箱过夜,次日3 800 r/min离心10 min(离心力1 051×g),分离血清。混合血清4 ℃存放,3 d内检测。批内差检测:SD大鼠和昆明小鼠混合血清分别进行10次重复测定,计算批内平均值、批内标准差和批内变异系数,批内变异系数=标准差/平均值×100%。日间差检测:在相同的实验条件下 ......

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