李跃文，万强

    本研究创新点：

    长期服用阿司匹林可损伤人胃黏膜上皮细胞(GES-1)，甘草总黄酮具有显著的胃黏膜保护和修复作用，但其对阿司匹林所致胃黏膜损伤的作用尚不清楚。本研究采用阿司匹林诱导GES-1损伤，加入甘草总黄酮和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)阻滞剂PD98059干预，探讨甘草总黄酮对阿司匹林损伤GES-1的保护作用及机制。研究发现甘草总黄酮可显著降低阿司匹林对GES-1增殖的抑制，减少由阿司匹林诱导的GES-1凋亡，降低乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量并增加超氧化物歧化酶(SOD)活性，并降低B淋巴细胞癌2(Bcl-2)表达，增加磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达；加入PD98059预处理可进一步增强甘草总黄酮上述药理作用，提示甘草总黄酮可通过促增殖、抗凋亡、抗氧化应激等途径减轻阿司匹林诱导的GES-1损伤，其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关。本研究创新点在于发现甘草总黄酮可通过抑制ERK1/2信号通路减轻阿司匹林诱导的GES-1损伤，研究结果有望为甘草总黄酮临床防治阿司匹林引起的胃黏膜损伤提供一定的实验依据。

    非甾体抗炎药如阿司匹林(aspirin)临床广泛用于治疗风湿性疾病及预防心脑血管疾病，但长期使用可损伤胃黏膜，诱发溃疡和出血[1]。因此，积极研究并开发药物抑制阿司匹林所致的胃黏膜损伤，具有重要意义。中医药具有胃肠道不良反应小的特点，甘草总黄酮(licoflavone)是从豆科多年生草本中药甘草的根和根茎中分离纯化的黄酮制剂，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等药理作用[2]。既往研究证实甘草总黄酮对慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜损伤均具有显著的保护和修复作用[3-4]，但其对阿司匹林所致胃黏膜损伤的作用尚不清楚。细胞外调节蛋白激酶(extra cellular regulated protein kinases，ERK1/2)信号通路与细胞的增殖、分化、凋亡密切相关，并在胃黏膜损伤的病理过程中起了关键作用[5]。本研究采用阿司匹林诱导人胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells，GES-1)损伤，加入甘草总黄酮和ERK1/2阻滞剂PD98059干预，探讨甘草总黄酮对阿司匹林损伤GES-1的保护作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 研究时间 2017年3—11月。

    1.2 实验材料 GES-1细胞株购于美国菌种保藏中心(ATCC)细胞库；甘草总黄酮购于惠州市九惠制药股份有限公司；阿司匹林(纯度≥99%)、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于美国Sigma公司；DMEM培养基购于美国Invitrogen公司；胎牛血清购于美国Gibco公司；乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒购于南京建成生物工程研究所；磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)抗体、B淋巴细胞癌2(Bcl-2)抗体、Bcl-2相关X蛋白(Bax)抗体、β-actin抗体购于美国Abcam公司；PD98059购于英国Tocris Bioscience公司；Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡试剂盒购于中国Beyotime公司 ......