党嘉文，董文斌，雷小平，何娜，郭琳

    本研究价值：

    高氧肺损伤尚无有效的治疗办法，本实验从细胞水平分析重组人促红细胞生成素(rhEPO)对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)的形态、增殖、凋亡的影响，明确了rhEPO对高氧肺损伤的保护作用，同时，设立了不同浓度梯度的rhEPO，进一步发现rhEPO的最适保护浓度为50、100 U/ml，为rhEPO临床治疗高氧肺损伤提供理论依据。

    高氧肺损伤的确切机制至今仍未阐明，也无有效的治疗办法。细胞凋亡是高氧肺损伤的一种主要表现形式[1-2]，红细胞集落刺激因子中存在着一种重组人促红细胞生成素(rhEPO)，其可刺激集落红细胞增殖分化，还可在红细胞生成的过程中，将患者体内的非血红素铁转移至患者的骨髓，从而减少氧自由基的产生，并采用抗细胞凋亡、促血管生成等多种方式对组织进行保护[3-5]。但是，rhEPO是否对高氧肺损伤有保护作用，目前国内外未见详细报道。故本研究以人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)为研究对象，高体积分数氧为处理因素，探讨rhEPO是否可以对高氧肺损伤发挥保护效应，为rhEPO参与高氧肺损伤的预防与治疗提供实验和理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 rhEPO(3 000 U/瓶，成都地奥九泓制药厂)；A549细胞(西南医科大学附属医院中心实验室)；标准胎牛血清(FCS，天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)；超低温冰箱(FORMA-86C，美国Thermo公司)；流式细胞仪(COULTER EPICS XL，美国Beckman公司)；倒置相差显微镜(IX71型，日本Olympys公司)；胰蛋白酶、DMEM高糖培养基、CCK-8(上海碧云天生物技术有限公司)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 实验时间 本研究起止时间为2017年1—12月。

    1.2.2 A549细胞的复苏、培养与传代 从超低温冰箱中取出冻存的A549细胞，置入37 ℃温水中，并对其进行摇晃以促进解冻，吸出细胞悬液，将其加入含有100 ml/L FCS的DMEM高糖培养基中，混匀后1 000 r/min离心5 min(离心半径0.5 cm)，弃上清液并再次洗涤 ......