彭俊，魏文娟，钱正明，黄建振，高世龙，张召才

    扩张型心肌病(DCM)是一种以单侧或双侧心腔扩大、心肌收缩功能减退、伴或不伴充血性心力衰竭为特征的心肌病。病毒性心肌炎是形成DCM的重要病因[1]，可引起心肌炎的病毒种类很多，其中以柯萨奇B组病毒(CVB)最为常见[2]。间充质干细胞(MSC)是一组成体干细胞，因其具有多向分化潜能、扩增迅速且低免疫原性[3]而被广泛应用于急性心肌梗死[4-5]及慢性心力衰竭[6-7]的实验研究中。心肌炎远期可进展成DCM，但是MSC治疗可否用于急性心肌炎患者目前尚不清楚。为此，本研究比较了病毒性心肌炎主要致病病毒——柯萨奇B3病毒(CVB3)感染对HL-1心肌细胞及MSC的影响，试图寻找一种新的心肌炎的治疗措施。

    1 材料与方法

    1.1 研究时间 本研究时间为2015年6月—2017年6月。

    1.2 主要试剂及仪器 Claycomb培养基(SAFC Biosciences公司)，DMEM培养基、RPMI 1640培养基(Invitrogen公司)，胎牛血清(FBS)、MEM2×培养基(Gibco公司)，肾上腺素、L-谷氨酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、氯仿(Sigma公司)，碱性成纤维细胞生长因子(Peptotech公司)，SYBR green定量PCR预混液(Eurogentec公司)，异丙醇(美国默克公司)，1.3%纯化琼脂(Difco公司)，大容量cDNA反转录试剂盒、7900HT快速实时PCR仪(美国应用生物系统公司)，CellTiter 96?AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(Promega公司)，VersaMax读板机〔美谷分子仪器(上海)有限公司〕。

    1.3 细胞培养 小鼠心肌细胞株HL-1心肌细胞保持了成年鼠心肌细胞的生物学特征，由德国U.Rauch教授赠予。Claycomb培养基含10% FBS、0.1 mmol/L肾上腺素、2 mmol/L L-谷氨酸以及1%抗生素液。所有的培养皿及培养板预先在0.1%明胶溶液中于37 ℃孵育0.5 h。人骨髓MSC(由德国M.Haag博士赠予)分离及鉴定方法见文献[4]，DMEM培养基含10% FBS、2 mmol/L L-谷氨酸、1% HEPES、2 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、1%抗生素液。HeLa细胞(购自Invitrogen公司)的培养基为RPMI 1640培养基，其含10% FBS、1%抗生素液。

    1.4 实时荧光定量PCR法检测CVB3基因拷贝数HL-1心肌细胞生长至80%汇合状态后以每孔3×105个/L接种于6孔板中 ......