曾志辉，王晓莉，叶艳琼，王甜甜，苏其利，詹纪春，申婕，曾茂君，赵明一*

    缺血性心脏病(IHD)是全球严重的健康问题之一，具有极高的发病率和致死率[1]。在心肌缺血条件下，冠状动脉供氧与心肌需氧之间的平衡被破坏，导致机体严重持续缺氧，最终血管代偿失衡并造成不可逆性心肌形态和功能的损害，其中氧化应激(OS)是主要病理改变之一[2]。OS是由于机体遭受严重刺激后使体内代谢失常而骤然产生大量活性氧(ROS)[3]，其后氧化作用占据主导位置，通过中性粒细胞炎性浸润、蛋白酶分泌增加、产生大量氧化毒性中间产物[4]、活化自噬、Ca2+超载、激活内质网应激等机制[5]进一步加重心肌缺氧，从而造成恶性循环，最终导致心肌功能减退而发展为IHD。

    花旗松素(Tax)是一种生物黄酮类物质，已有研究表明其因具有降血脂、降血压等效应，在心血管疾病防治中具有潜在应用价值[6]。但目前关于Tax对受到OS损伤的血管内皮细胞和心肌细胞的保护作用机制尚未明了。有研究表明，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路可通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)等分子活性发挥抗OS作用，另一方面高迁移率族蛋白1(HMGB1)也与OS、炎性反应、自噬等密切相关[7-8]。本文探讨Tax对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2细胞OS损伤的保护机制，为OS损伤性疾病的新药研发提供基础依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞系 大鼠心肌细胞株H9C2细胞由长沙维尔生物科技有限公司提供。

    1.1.2 实验仪器 蛋白质电泳仪(美国Bio-Rad公司)，转膜仪(美国BD公司)，高速离心机(德国艾本德股份公司)，凝胶扫描成像系统(上海宝山顾村电光仪器厂)，倒置显微镜、荧光倒置显微镜(日本Olympus公司)，紫外分光光度计(上海江仪仪器有限公司)，水平琼脂糖电泳槽(北京六一生物科技有限公司)。

    1.1.3 主要实验试剂 DMEM培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(美国ScienCell公司)，Tax(上海远慕生物科技有限公司)，Mito-Tracker Green(C1048，美国Molecular Probes公司)，蛋白酶抑制剂(德国Merck公司)，蛋白磷酸酶抑制剂(瑞士Roche公司)，ROS荧光染色试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，RT-PCR试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)，RT-PCR引物(南京金斯瑞生物科技有限公司)，p38抗体(14064-1-AP)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2抗体(16443-1-AP)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抗体(11023-1-AP)(美国proteintech公司) ......