刘传波，杨建飞，陆树良

    糖尿病状态下，机体内胶原蛋白与葡萄糖等代谢分子间发生非酶促化学反应，生成晚期糖化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)[1-2]，AGEs是长期甚至数年内的糖化和氧化应激“代谢记忆”的载体[3]，可预测数十年后糖尿病血管并发症的发生[4]。故评估皮肤胶原上AGEs蓄积程度对判断糖尿病代谢控制及预测糖尿病并发症具有重要作用。目前临床上可使用AGE ReaderTM仪器无创检测患者前臂皮肤获得皮肤自体荧光(skin autofluorescence，SAF)值[5]，反映皮肤组织中蓄积的各种AGEs总含量。本研究拟通过免疫荧光双标法对糖尿病足溃疡患者和非糖尿病患者两组人群皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积进行比较，同时分析两组患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与反映皮肤组织中AGEs总含量的SAF值之间的相关性。

    本研究创新点：

    本研究通过免疫荧光双标法对糖尿病足溃疡和非糖尿病患者皮肤中Ⅰ型胶原蛋白及晚期糖化终末产物(AGEs)荧光强度进行比较，同时用AGE Reader无创检测患者上臂皮肤自体荧光(SAF)值，以期比较两者皮肤胶原蛋白AGEs蓄积程度的差异，同时，分析Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与SAF值的相关性。结果表明，糖尿病足溃疡患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积明显增加，SAF值明显升高，而且，皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与SAF值呈正相关，提示无创检测的SAF或许可作为评估局部皮肤AGEs蓄积程度的简单方法。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2014年6—8月上海中医药大学附属上海市中西医结合医院脉管科住院治疗的糖尿病足溃疡患者11例为糖尿病足溃疡组，同期上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤科住院治疗的小面积烧伤的非糖尿病患者8例为非糖尿病组。所有患者告知研究目的及方法，取得同意后签署知情同意书。

    1.2 主要仪器 Nikon光学显微镜YS100(日本 Nikon)，Zeiss荧 光 显 微 镜 Axioskop 2 plus( 德国 Zeiss)，Leica组 织 切 片 仪 CM3050 S( 德 国Leica)，-80 ℃Thermo超低温冰箱Forma -86C ULT Freezer(美国Thermo)，数字式pH测量计inolab pH(德国WTW)。

    1.3 主要试剂 小鼠源性抗Ⅰ型胶原蛋白单克隆抗体(英国Abcam)，兔源性抗AGEs多克隆抗体(英国Abcam)，Alexa Fluor? 488结合的抗鼠二抗(美国Cell Signaling Technology) ......