彭杨茜子，孔瑞娜，张兰玲，赵东宝

    本研究创新点：

    本研究阐明艾拉莫德对白介素1β诱导软骨细胞基质代谢的影响，为今后研究艾拉莫德防治骨关节炎提供理论依据。关节软骨细胞的修复一直是骨关节炎疾病研究的热点，本研究揭示艾拉莫德可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路，调控软骨细胞基质代谢，修复软骨损伤，为艾拉莫德增加抗骨关节炎的治疗作用。

    骨关节炎(OA)是一种以关节软骨退行性变和继发骨质增生为特征的慢性关节疾病，其发病机制复杂。软骨细胞退变在OA发生、发展中起关键作用。近年来研究发现Wnt信号通路广泛存在于软骨细胞中，表现为异常活化的状态，从而影响软骨细胞的增殖和凋亡失衡[1]。Wnt/β-catenin信号通路是Wnt通路中最经典的信号通路，在Wnt/β-catenin信号通路中起着重要作用的蛋白有Wnt、β-catenin、Axin、Frz、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)及活化蛋白(APC)等。此通路下游基因和蛋白表达可影响关节软骨生长代谢，在OA发生、发展中起重要作用。艾拉莫德作为一种新的抗炎和免疫调节性质的小分子药物，不仅具有抗风湿药物(DMARDs)的免疫调节、抑制关节破坏功能，前期研究还证实艾拉莫德可以影响骨代谢[2-3]，但尚未见艾拉莫德作用于软骨细胞相关机制的研究。本研究基于Wnt/β-catenin信号通路，从细胞、分子水平探讨艾拉莫德对白介素1β(IL-1β)诱导的大鼠OA软骨细胞基质代谢的影响及作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 2017年2—12月选取SPF级雄性2月龄健康Wistar大鼠10只，体质量约300 g，由上海市公共卫生临床中心实验动物中心提供。

    1.2 主要试剂和仪器 RT2 First Strand Kit(QIAGEN)、Anti-β-catenin antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-GSK-3βantibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-基质金属蛋白酶(MMP)-3 antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-MMP-13 antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-Ⅱ型胶原antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-蛋白聚糖antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Anti-beta actin antibody〔艾博抗(上海)贸易有限公司〕、Trizol(美国英杰生命技术有限公司)、RNeasy mini kit(美国英杰生命技术有限公司)、Eclipse TE-2000U倒置显微镜〔尼康仪器(上海)有限公司〕、Labofuge 4008离心机〔赛默飞世尔科技(中国)有限公司〕、二氧化碳培养箱〔赛默飞世尔科技(中国)有限公司〕、Nanodrop 2000分光光度计〔赛默飞世尔科技(中国)有限公司〕、9700型实时荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司) ......