王朦，贾国存，成怡冰，王海军，刘炜，郭亚琼

    急性髓系白血病(AML)是一组临床及生物学特征均具有异质性的恶性疾病，好发于儿童，占急性白血病的20%～25%[1]。随着危险度分层指导个体化治疗的广泛应用，儿童AML的预后较以往大幅改善，诱导化疗总体完全缓解率可达85%～90%，且5年总生存率已上升至60%～75%[2]。但仍有部分AML患儿诱导化疗病情难以缓解或出现复发，AML长期治疗仍面临着高复发率、治疗相关死亡风险、化疗相关毒副作用等多重挑战[3-4]。青蒿素为我国学者首次从菊科植物黄花蒿中提取的化合物，青蒿琥酯为青蒿素类衍生物，为中国自主研发的具有倍半萜结构的青蒿素类抗疟特效药。近年来，大量实验研究发现其对白血病、口腔癌、膀胱癌、宫颈癌等多种疾病均具有较强的抑制作用[5-6]，对白血病也有高度敏感性，且毒副作用小、易耐受，并与传统化疗药物不存在交叉耐药作用[7]，这为研究开发经济、有效的AML治疗药物提供了新的线索。基于此，本文拟观察不同浓度的青蒿琥酯对AML原代细胞与细胞株K562的增殖抑制及促凋亡作用，以期为进一步明确AML的发病机制及青蒿琥酯的临床应用提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 研究材料 AML儿童纳入标准：(1)经细胞形态学、组织化学染色及流式细胞免疫学分型确诊；(2)初治或复发AML；(3)患儿家属均对本研究内容知情且签署知情同意书；(4)临床诊治资料完善。

    采用密度梯度法分离2016年10月—2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的骨髓液4～5 ml，加入抗凝离心管(含肝素0.3 ml)，取等体积磷酸缓冲盐溶液(PBS)将骨髓液稀释，充分混匀。取淋巴细胞分离液4～5 ml加入干燥离心管中，再缓慢将稀释后的骨髓液加入分离液上层，2500 r/min离心20 min(离心半径为15 cm)，取中间单个核细胞层，移入干洁离心管中，用PBS漂洗2次，1000 r/min离心5 min(离心半径为15 cm)，弃上清液，37 ℃、95%饱和湿度、5% CO2条件下RPMI 1640培养基中培养，每3 d换液1次。调整密度为1×106/ml，取处于对数生长期、细胞活性>95%的细胞进行实验。入选的24例初治或复发AML患儿FAB分型均为M1型，其中男13例，女11例；年龄(7.2±1.6)岁；正常核型AML 8例，异常核型AML 16例。

    AML细胞株K562购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。培养于含10%胎牛血清、100 μg/ml链霉素、100 μg/ml青霉素的RPMI 1640培养液中 ......