栾顺莲，李玉娜，金丹，高勇，王德强，邵翠杰*

    急性炎性痛是目前临床工作中最为常见的病理性疼痛之一，是严重影响人类身体健康和生活质量的临床难题，而其如果不能被充分控制，就有可能转化成为慢性炎性痛。因此探讨其发病机制和治疗措施有重要的临床意义。

    甲硫氨酸为人体必需氨基酸之一，人体内不能合成，必须依靠外源补充。天然得到的甲硫氨酸为L-甲硫氨酸(L-MET)。甲硫氨酸在人体内与ATP结合生成S-腺苷氨酸(SAM)，其是体内甲基的最重要的直接供体，修饰DNA、RNA及组蛋白，进而影响DNA复制、转录和翻译，在表观遗传调节方面发挥重要作用[1]。DNA甲基化作为DNA序列的修饰方式，是一种重要的表观遗传调节机制，能够在不改变DNA分子一级结构的情况下调节基因组的功能，在生命活动中起着重要的作用。有研究发现，DNA甲基化参与调控学习记忆能力[2]，而疼痛敏感化调节的细胞学基础与细胞记忆密切相关[3]，DNA甲基化很有可能参与急性疼痛的调控过程[4-7]。而甲硫氨酸作为人体必需氨基酸之一，能够参与并影响体内DNA甲基化，对治疗或预防急性炎性痛是否有作用则未见报道。本研究采用甲醛溶液诱导急性炎性痛模型大鼠，观察注射L-MET是否会减轻大鼠足底急性炎性痛并探讨其机制，以期为寻找新的疼痛生物标志物和开发理想的镇痛新药提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 实验时间 本研究时间为2017年7月—2018年12月。

    1.2 实验动物 健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只，体质量200～250 g，清洁级，由济南实验动物中心提供〔合格证号SYXK(鲁)2018 0022〕。12 h昼夜交替环境饲养，饮水、食物自由摄取，所有动物适应环境72 h后开始实验。本实验经滨州医学院实验动物伦理委员会批准，所有操作遵守国际疼痛研究会相关指南及《实验动物机构认可标准法规实用手册》[8]，所有动物实验符合医学伦理学标准。

    1.3 实验仪器与试剂 Bio-Rad CFX96荧光定量PCR仪(美国 Bio-Rad公司)，大鼠疼痛自主活动记录仪(安徽正华生物仪器设备有限公司)，甲硫氨酸(北京索莱宝科技有限公司)，甲醛溶液(国药集团化学试剂有限公司)，全基因组DNA甲基化定量试剂盒(北京艾德科技有限公司)，反转录试剂盒〔宝生物工程(大连)有限公司〕，引物合成由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，动物组织基因组提取试剂盒(美国Axygen公司)。

    1.4 实验动物分组以及给药方法 将大鼠按照随机数字表法分为A组(0.9%氯化钠溶液+0.9%氯化钠溶液组)、B组(L-MET+0.9%氯化钠溶液组)、C组(0.9%氯化钠溶液+2 g/L甲醛溶液组)、D组(L-MET+2 g/L甲醛溶液组) ......