韩涛，尹逊路，展嘉文，魏戌，冯敏山，于杰，李学朋，陈明，朱立国*

    椎间盘退行性变(intervertebral disc degeneration，IDD)是导致脊柱退行性疾病的根本因素，也是引起腰腿部疼痛、麻木的主要原因之一[1-2]。据相关数据统计，美国下腰痛就诊量在所有到医院就诊患者中排第2位，仅次于因呼吸道疾病就诊量[3]。当前，下腰痛这一类疾病无论在经济上还是对人类健康上，已经产生了严重影响[4-5]。终板位于上下椎体末端和邻近椎间盘交界处，其功能主要为对椎间盘的力学传导与营养传输。有研究表明，终板退变不仅能够引发临床上脊柱疼痛症状，而且还会加速椎间盘退变[2-3]。

    临床研究证实，补肾活血中药可显著降低椎间盘源性腰痛患者的疼痛评分及复发率[6]。但补肾活血中药是否通过介导Wnt/β-catenin信号通路调控终板软骨细胞而发挥延缓IDD的作用，有待进一步证实。本实验将利用自主研发的脊柱运动节段离体培养和加载装置构建离体兔脊柱运动节段退变模型，采用荧光定量聚合酶链式反应法(RT-PCR)、Western blot和免疫组化等技术检测退变模型终板软骨细胞功能形态、组织中相关mRNA及蛋白表达分布的情况，旨在从分子水平探讨补肾活血中药在该信号通路中调控终板软骨细胞而发挥延缓IDD的作用机制，以期阐明该复方治疗IDD的药效作用，并为补肾活血中药的临床应用提供实验理论依据，为中药复方干预骨退变机制的研究提供基础。

    1 材料与方法

    1.1 研究时间 2019年。

    1.2 实验动物 于北京市昌扬西山养殖场采购40只健康新西兰大白兔，雌雄各20只，体质量为2.5～3.0 kg，动物合格证编号：SCXX(京)2016-0007。

    1.3 药物、试剂和仪器[7-10]

    1.3.1 药物 补肾活血中药组成：杜仲15 g、补骨脂10 g、怀牛膝10 g、丹参12 g、威灵仙10 g、木瓜9 g。中药由中国中医科学院望京医院中药房提供。

    1.3.2 试剂 DMEM/F12培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(美国Gibco公司)，苏木红及伊红染液(杭州化学试剂厂)，DAB显色剂(北京中杉产品)，WB一抗(Gelsolin兔多克隆抗体，美国Abcam公司，货号：Ab74419)，WB二 抗(KPL山羊抗兔IgG，美国KPL公司，货号：074-1506)，DL2000 DNA Marker(TaKaRa， 货 号：3427Q)，PVDF膜(美国Millipore公司，货号：PVH00010) ......