于仁峰，邹小仓，邹大阳，李琳昊，王可慧，贺晓明，徐雅晴，秦日辉，莫冬冬，段佳慧，余涛*，刘威*，郭金鹏*

    目前，对于由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)没有特效治疗方法，早发现、早报告、早检测、早隔离是疫情防控的重要手段[1]。SARS-CoV-2 属于β-冠状病毒簇，是一种具有外膜的正链单股RNA 病毒，其基因组可编码 RNA聚合酶、刺突 (S) 糖蛋白、膜 (M) 糖蛋白、包膜(E) 糖蛋白和核衣壳(N)蛋白[2]。其中N蛋白不仅将病毒RNA和蛋白质包装成病毒体，还能促进病毒RNA的转录和复制，并损害宿主细胞的免疫反应，是一种高免疫原性且在感染过程中大量表达的蛋白，目前关于SARS-CoV-2 N蛋白的报道相对较少，迫切需要对SARS-CoV-2 N蛋白的更新认识[3-5]。同时，N蛋白相对保守，在病毒的结构蛋白中所占比例最大，感染早期机体能产生抗N蛋白的高水平抗体[6]。另外一个重要的蛋白是S蛋白，其可以介导SARS-CoV-2进入宿主细胞。研究显示，中和抗体主要通过与S1亚基上的受体结合域(receptor binding domain，RBD)片段结合进而竞争性地阻断S蛋白与血管紧张素转换酶-2(ACE2)的结合，因此，SARS-CoV-2的S1蛋白是抗病毒中和抗体的重要靶点[7]，能够诱导机体产生中和抗体，是研究疫苗的常用抗原[8]。检测血清中SARS-CoV-2抗体不仅简单、快速，而且能区分急性感染和既往感染，更适合基层医院使用。冠状病毒基因组所编码的抗原中，N 蛋白具有较高的免疫原性，可在早期感染时分泌到体液中，作为抗原检测的生物标志物，同时机体产生抗N蛋白抗体可被用于检测SARS-CoV-2感染[9]。本研究建立了SARS-CoV-2抗N 蛋白IgG抗体荧光免疫层析方法，具有检测时间短、方法简便的优点，同时可使用免疫荧光检测仪读取硝酸纤维素(NC)膜质控线(C线)、检测线(T线)荧光值，使灵敏度更高，更客观可靠，可用于检测人血清、血浆、指尖血样本中的抗SARSCoV-2 N蛋白IgG抗体。制备的免疫层析检测试纸条，可辅助临床判断被检者是否感染SARS-CoV-2以及体内是否产生抗体，对疾病流行筛查及评估均具有较大意义。

    1 材料与方法

    1.1 材料来源 50例健康人血清(阴性样本，本课题研究始于2020年8月，期间解放军疾病预防控制中心采集注射腺病毒疫苗的健康人血清)及COVID-19患者阳性灭活血清(阳性样本，来源于解放军疾病预防控制中心2020年3月随机采集于武汉火神山医院的阳性血清样本) ......