黄红叶，林志刚，陈水金，陈乐春，张幻真，陈进城，蒋晶晶，江 煜，王晓华，方佳钰

    (1.福建中医药大学，福建 福州 350122；2.福建中医药大学附属康复医院，福建 福州 350003；3.福建省康复技术重点实验室，福建 福州 350003)

    神经病理性疼痛是一种复杂的慢性疼痛，由中枢或周围神经系统的损伤或功能障碍引起[1]。行为学上，它的特征是异常的自发性疼痛，疼痛知觉的改变，以及刺激诱发的异常疼痛症状，已造成巨大的社会和经济负担[2]。临床与动物研究均发现推拿可显著缓解神经病理性疼痛，但镇痛机制尚不明确[3-4]。

    钙调蛋白激酶Ⅱ(calmodulin dependent protein kinase II,CaMKⅡ)是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸化蛋白激酶，参与疼痛中枢敏化，对神经元可塑性有重要意义[5]。突触素(synaptophysin，SYP)表达于突触囊泡膜，参与了突触的形成与调节，在神经病理性疼痛发生发展中起重要作用[6]。CaMKⅡ和SYP 是突触相关蛋白，其在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角中的表达增加[7-8]，在海马中降低[9-10]，提示神经病理性疼痛的发生可能与脊髓背角和海马的突触可塑性的改变有关。我们前期研究发现推拿能够抑制脊髓背角突触可塑性[11],基于此，本研究通过观察推拿手法对CCI大鼠海马神经元及突触相关蛋白CaMKⅡ与SYP 的表达，探讨推拿手法的镇痛机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组 取32 只体质量180-200g，成年雄性SD 大鼠，由福建中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(沪)2017-0005。正式实验前适应性喂养1周后，随机分为空白组、假手术组、模型组、推拿组，每组8只。

    1.2 实验试剂与器材 大鼠固定器(专利号：201821139321.X)、自制推拿按摩指套(专利号：ZL201821318407.9)、HE 染色试剂盒(索莱宝)、兔多克隆抗体CAMKⅡ(proteintech)、兔多克隆抗体Syn‐aptophysin(proteintech)、GAPDH 内参(proteintech)、488 绿色荧光二抗(proteintech)、HRP 标记抗兔二抗(proteintech)、BCA 蛋白定量试剂盒(博士德)、SDSPAGE 凝胶制备试剂盒(博士德)、蛋白质常规分子量标(proteintech)、ECL 超敏化学发光检测试剂盒(百赛生物)、抗荧光淬灭封片液(碧云天)、ImageLab 图像分析系统，ImageJ图像处理软件 ......