摘要：目的：建立重组人HIF-1α真核表达载体质粒pcDNA3-rhHIF-1α，为进行人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体的制备研究做准备。方法：从人血细胞中提取总RNA，RT-PCR法反转录合成eDNA。酶切插入pcDNA3载体。结果：获得重组的人HIF-1α真核表达载体质粒pcDNA3-rhHIF-1α，经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计的相同，测序插入pcDNA3载体部位正确。结论：重组的人HIF-1α，所选用的pcDNA3可高表达目的基因，为利用其进行人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体的制备研究奠定了基础。

    关键词：缺氧诱导因子；载体；质粒

    中图分类号：R392.1

    文献标识码：A

    文章编号：1008-2409(2007)03-0421-03

    缺氧诱导因子(HIF)是1992年由Semenza等发现的一种氧依赖转录激活因子，通过与低氧反应元件(HRE)结合，引发下游基因的转录。HIF-1是由α亚基和β亚基组成的异二聚体。HIF-1β为其组成性表达，HIF-1α为其功能性亚基，HIF-1α极不稳定，在常氧条件下，半衰期不到10min，与其降解有关的结构域称为氧依赖的降解结构域(oxygen-dependent degrada-tion domain，ODD)(氨基酸401～603)。本实验的目的是通过分子克隆的方法在体外重组HIF-1α ......