表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建(1)
表达hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体的构建,hCD4,hCCR5,质粒,基因表达
摘要:目的:构建一种高效转染hCD4和hCCR5基因的慢病毒载体。方法:应用Gateway技术构建可表达hCD4和hCCR5的质粒载体PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5,并进行酶切和测序鉴定,进行慢病毒包装,用qRT-PCR方法检测293T細胞中hCD4/CCR5的mRNA表达。将本慢病毒载体转染于小鼠白血病细胞L615,应用qRT-PCR检测细胞内hCD4/CCR5 mRNA的表达及对HIV-1的易感性。结果:成功构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR5质粒表达载体,包装成的慢病毒载体在293T细胞中具有hCD4/CCR5 mRNA水平的高表达(P<0.05);转染于L615细胞亦表现出hCD4/CCR5 mRNA水平的高表达(P<0.05),并具备了HIV-1入胞感染的特点。结论:成功建立hCD4和hCCR5基因双启动的慢病毒载体 ......
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