范 娜，彭之东，白文斌

    (山西农业大学高粱研究所 / 高粱遗传与种质创新山西省重点实验室，山西榆次 030600)

    盐胁迫是一类重要的非生物胁迫，严重制约了农业的可持续发展[1]。盐胁迫条件下，土壤溶液渗透离子浓度增高，渗透势发生改变，导致细胞质膜透性改变、影响植物根系对矿质元素的吸收和植株形态的发育，抑制光合作用、呼吸作用以及物质代谢等途径[2]。盐胁迫对作物的危害是一个复杂的生理过程，而作物抵抗盐胁迫的能力主要由植物本身的遗传基因控制，不同的作物对盐胁迫的响应方式也有所差异[3]。高粱作为一种重要的粮食兼经济作物，具有较强耐盐能力。根据土壤盐分变化规律可知，高粱苗期对盐分胁迫最为敏感，苗期生长的好坏影响高粱的成熟度及产量[4]。目前国内外对高粱耐盐性的研究大都集中在形态和生理水平上，对高粱耐盐胁迫的转录组分析、高粱耐盐代谢途径和关键耐盐调控基因挖掘等方面研究较少[5–6]。转录组测序技术(RNA-seq)在农作物抗逆性研究中应用的越来越广泛，对植物抗逆基因发掘和机制的研究具有重要意义。

    本研究以高粱作为试材，结合苗期生长指标的测定，对盐胁迫处理表型差异较大的高粱材料进行转录组测序，对测序数据进行功能注释，从转录组水平宏观分析盐胁迫下基因的表达特性，通过差异基因聚类分析、pathway分析和实时荧光定量RTPCR技术等，从分子水平研究植物盐胁迫反应的生理机制。发掘其中的关键调控基因，探求高粱在盐胁迫下的耐受机制，旨在为高粱育种和耐盐栽培提供一定的生理生化和分子理论基础。

    1 材料和方法

    1.1 试验材料及室内耐盐鉴定

    前期采用室内盐分模拟和大田鉴定相结合的方法对600份高粱亲本材料进行筛选，通过测定发芽势、发芽率、发芽指数、根长、叶长、叶片酶活性、叶片Na+和K+含量、幼苗生长指标、大田农艺指标及产量指标，筛选出耐盐表型材料67B和盐敏感表型材料3560R[7–8]，作为本次试验的供试材料。

    1.1.1 叶片酶活性测定 取盐处理(150 mmol/L NaCl溶液处理) 12 h后的叶片材料，剪取擦拭干净叶3～5片，3次重复，经液氮处理放入超低湿冰箱中保存待测，利用南京建成试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量。

    1.1.2 叶片 Na+、K+含量测定 取盐处理 12 h 后叶片材料，采用火焰光度计法测定Na+、K+含量[7]。

    1.1.3 幼苗生长指标测定 用直尺测定植株根长、芽长，用电子天平称量植株鲜重[8] ......