PBS冲洗3次。除去PBS后，于玻片上滴加1滴DAB显色剂，在光镜下观察染色情况，以阳性反应着色最强而背景开始染色为度，自来水冲洗。系列酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。其中以PBS代替一抗样本作为空白对照。

    3 结果

    3.1 脐血间充质干细胞的分离与扩增

    3.1.1 MSC的原代培养：将脐血分离后获得的单个核细胞接种于一次性塑料培养瓶，48h后可见贴壁细胞出现，这些细胞在形态上呈现非均一性，有大而多核的破骨样细胞和呈纺锤形或长梭形的成纤维样细胞。随着培养时间的延长，贴壁细胞增多。经过约3周的培养，成纤维样细胞增殖可达约60%融合，细胞排列有一定方向性。

    3.1.2 脐血MSC传代培养：原代贴壁细胞长成60%融合后，用0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA消化，1：1传代。细胞在接种后呈圆形，折光性好。2h后开始贴壁，12h后贴壁细胞可达到90%以上，并逐渐伸展；传代后细胞均匀散在分布，生长迅速，不再形成集落；接种2天后即开始增殖，约10天左右可达到80%融合。随着进一步的传代过程，其他细胞逐渐被去除，贴壁细胞呈均一的长梭形，增殖加快，1周左右即可达80%-90%融合。

    3.1.3 传代MSC的生长曲线：传代的P3代细胞和冻存复苏后的P3代细胞相比较，冻存组细胞的细胞活性和增殖能力均较未冻存细胞略有降低。冻存组细胞在复苏后，细胞数量有所减少。生长曲线显示，冻存组细胞潜伏期增长 ...... 濠碘€冲€归悘澶愬箖閵娿儲韬ù锝堟硶閺併倝骞嶇€ｎ偅绨氱紒娑橆槹缁侊妇鎲撮崼鐔割槯闁哄啰濮电涵鍫曞蓟閵壯勭畽闁瑰瓨鐗旂粭鍛姜閽樺寮块柡鍌氭祫缁辨繈宕ｉ婵嗗幋闁哄嫷鍨甸～锕傚箹濠婂懎鍋嶇€殿喗娲橀幖鍛婂緞鏉堚晜鍩傞柍銉︾矎濞村棝鎯嶆担娴嬪亾濠垫挾绀夐悹鍥棑閸嬶綁宕欑拠鑼綄妤犵偞娲樺〒鑸电▔鐎ｎ偅鐓欓柣銊ュ閳ь剚绮庨弫鎼佹嚇閹寸姴顣奸柍銉︾箖閸ㄣ劑鍨惧⿰鍐ㄦ枾缂傚啯鍨块妴澶愬灳濠靛⿴鍟忛梻鍌ゅ枔閳ь剨鎷�


闂傚嫭鍔掔花顒勫嫉瀹ュ懎顫ら柛锝冨妼鐢洭宕濆☉宕囩缂傚啯鍨归悵顖炴焾閵娿儱鐎诲ǎ鍥ｅ墲娴煎懘宕ｉ鍐繑闁绘牕宕缓鐐濮橆剚鍠呴柟瀛樼墬濠€浣圭▔閳ь剛鈧姘ㄨⅶ闁告帒妫涘▓鎴濃枖閵娿儱鏂€濞村吋鑹鹃幉鍐裁规担绛嬫綌闁靛棴鎷�
婵繐鎷�濞ｅ洠鍓濇导锟�闂傚洠鍋撻悷鏇嫹 2 缂佸鍨伴崹搴ㄦ晬閸繂甯抽悹鎰潐閺佺偤宕樺畝鈧▍銉ㄣ亹閺囩偞鍊�婵絽绻愰妵澶愬矗椤栨瑤绨板Λ鏉挎瑜帮拷10濞戞搩浜炶ⅶ闁告帪鎷�闁挎稑顦埀顒婃嫹
    濞ｅ洠鍓濇导鍛閸涱剛杩旈柛娆忓€介埀顒€鍠涚槐婵囩▔瀹ュ棛鈧垶骞嬮幇顏呭床濞达絾娲戠粻锝咁嚈妤︽鍞撮柕鍡曠劍鐢綊鎳￠幇顓炵仐闁圭ǹ娲ょ槐鈺呭Υ閸屾稒鐎紒鏃傚Х婢ф寮堕崘銊ф剑濞存粌楠哥敮顐︽媼濡炲墽绋婇柡澶婂暕濮瑰鏁嶅畝鍐仧闁诡喓鍔忛缁樼▔閻戞﹩鍔冮柡鍌氭矗缁楀鈧绮忛～锕傚绩鐠鸿櫣绉垮〒姘☉閵囧洨鈧娉涢崢銈囨嫻瑜版帗顫夐悹鍥︾串缁辨繄鎷犻悜钘変粡濞寸姾鍩栭崹銊╂偨娴ｅ啰妯堥梺顐ｆ皑閻擄繝骞嬮幋婊勭拨闁挎稑鏈崹婊勭椤掍焦鏆柛鎺嶅嵆閳ь剚姘ㄩ悡锟犲触鎼搭垳绀夊ù鍏兼皑閻濇盯宕￠崘鑼闁诡喓鍔庡▓鎴炴媴濠婂啯鎯傚ù鐘插濠€鎵磾閹寸姷褰查柛鎺斿█濞呭酣濡撮敓锟�

鐎甸偊鍠曟穱濠囧棘閸モ晝褰�  闁稿繗娅曢弫鐐烘儌閻愵剙顎�  閻犲洤瀚鎴﹀礄閻樻彃缍�  闁瑰吋绮庨崒銊╁即閺夋埈妯�