TGF-β1基因-509C/T单核苷酸多态性与病理性瘢痕易感性研究(2)
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参见附件(2315KB，3页)。
1.2.4 杂交：固化上寡核苷酸探针的膜条连同40μlPCR产物加入含5ml2×SSC～0.1%SDS的试管中，100℃水浴变性7min，置杂交仪中42℃杂交3～6h；然后放入42℃预热的0.5×SSC～0.1%SDS中洗膜10min；将膜条转入含2.5U辣根过氧化物酶连链酶抗生素蛋白的10ml2×SSC～0.1%SDS试管中，室温反应15min；再用2×SSC～0.1%SDS洗膜5min×2次；最后，将膜条转入20ml显色液[19ml0.1mol/L柠檬酸钠(pH5.0)中加30%过氧化氢3μl和0.1mg/mlTMB]中避光显色5～15min,期间观察、记录结果。
1.3 为检验反向点杂交结果的正确性，随机抽取15例PCR扩增产物送上海生工生物公司测序。
1.4 统计学处理：应用SPSS10.0统计软件包处理数据，采用χ2检验分析各组等位基因和基因型频率分布的差异，并计算表示相对风险度的比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidenceinterval,CI)。
2结果
根据我们设计的方案，杂交结束后膜条上格显示蓝紫色斑点为C/C基因型，中格显示蓝紫色斑点为T/T基因型，而上、中全部显示为C/T基因型，下格为空白对照，无斑点显示(图1)。病理性瘢痕组和正常对照组TGF-β1基因多态性比较如表1所示。
病理性瘢痕组的C等位基因频率(49.7%)明显高于正常对照组(40.4%，χ2=4.676,P=0.031, P<0.05)。病理性瘢痕组的C/T、T/T基因型频率分别为43.9%和28.4%，与正常对照组相比差异无统计学意义(χ2值分别为0.763和1.376；P值分别为0.382和0.241)。而病理性瘢痕组的C/C 基因型频率为27.7%，明显高于正常对照组(χ2=5.493,P=0.019,P<0.05)。与C/T、T/T基因型相比， C/C基因型者患病理性瘢痕的相对风险性(OR)明显增高(OR=2.041,95%CI:1.116～3.731)。
我们随机抽取的15例PCR扩增产物测序结果与反向点杂交结果完全吻合 ......
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