持续静压力对人牙周膜成纤维细胞RANKLmRNA分泌活性的影响

http://www.100md.com 2009年2月1日 《中国美容医学》 2009年第2期

     [摘要]目的：研究持续静压力(continuously compressive pressure,CCP)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,HPDLs)核因子受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)分泌活性的影响，初步探讨其在正畸性骨改建中的作用机制。方法：用组织块酶消化法培养获得人牙周膜成纤维细胞。建立空气静压力加载模型，分别对细胞加载0、50、100、150、200持续静压力0、0.5、1、1.5、2、4、6、12h，利用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reation,RT-PCR)检测RANKLmRNA分泌活性的变化。 结果：牙周膜细胞在持续静压力作用下RANKLmRNA表达增强，100Kpa加压1.5h时，RANKLmRNA的表达达峰值。结论：持续静压力可上调人牙周膜成纤维细胞RANKLmRNA的表达。

    [关键词]牙周膜细胞；静压力；核因子受体活化因子配体；逆转录聚合酶链反应

    [中图分类号]R783.5[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2009)02-0210-04

    Effect of continuously compressive pressure on espression of RANKLmRNAin human periodontal ligament fibroblast in vitro

    WU Cheng-qiong,ZHOU Hong,WANG Xiao-rong

    (Department of Orthodontics,the Affiliated Stomatological Hospital,Medical School of Xi'an Jiaotong University,Xi'an 710004,Shaanxi,China)

    Abstrcat:ObjectiveTo study the effect of continuously compressive pressure(CCP) on the expression of receptor activator of nuclear factor kappa B ligand(RANKL) in human periodontal ligament cells(HPDLs),and to investigate the role of continuously compressive pressure in alveolar bone rebuilding during orthordontic tooth movement. MethodsHPDLCs were isolated from human periodontal ligament by explanting enzymatic digestion with trypsin and collagenase. Estanblish a pressure model ,sustained static pressure 0Kpa、50 Kpa、100 Kpa、150 Kpa、200 Kpa were laid on HPDLCs for 0h、0.5h、1h、1.5h、2h、4h、6h、12h, respectively. The RANKL expression was identified by reverse transcription-polymerase chain reation(RT-PCR). Results The expression of RANKLmRNA significant increased after pressure exposed, especially in the group of 100 Kpa pressure lasted for 1.5 hours. ConclusionCCP can up-regulate the expression of RANKLmRNA in HPDLFs.100 Kpa pressure lasted for 1.5 hours was the suitable condition.

    Key words: human periodontal ligament fibroblasts;continuously compressive pressure;RANKL;RT-PCR

    正畸牙移动是一个复杂的机械生物学反应过程，牙周组织感应力学刺激后所发生的组织改建是牙齿移动的基础。牙周膜细胞是正畸矫治力的直接感应细胞[1]，能将所受到的机械应力转化为细胞内外的生物化学信号，又是正畸力的效应细胞[2]，在外力的作用下可分泌并释放多种细胞因子，同时参与了骨吸收和骨形成的过程。体外实验证明对牙周膜细胞施加机械力，细胞表达RANKL增强，RANKL作为骨吸收过程中的关键因子，在破骨细胞的分化和活化过程中其着重要的作用。近年来，RANKL已作为骨代谢途径的关键因子而被广泛关注。本实验通过对HPDLFs施加不同大小和不同作用时间的持续静压力，观察静压力条件下RANKL表达活性变化，寻找诱导牙周膜细胞在齿槽骨改建中发挥作用的最佳作用力值和作用时间。

    1材料和方法

    1.1试剂及仪器：主要试剂有：DMEM培养基(低糖)(GIBCO公司，美国)、胎牛血清FBS(灏洋，天津)、0.25%胰蛋白酶(Sigama公司，美国)、SABC免疫组化试剂盒、波形丝蛋白单克隆抗体，角蛋白单克隆抗体(博士德公司，杭州)、I型胶原酶(Sigama公司，美国)；主要仪器有：全自动高压灭菌锅HV-50 (HIRAYAMA,日本)；低温高速离心机(3K18) (Sigma,德国)；倒置显微镜 (Nikon, 日本)；CO2培养箱(BB16) (Heraeus,美国)；超净工作台(BCM-100A) (中国，苏州)；空气静压力细胞加载系统(自制)。PCR扩增仪(9700型)(ABI，美国)；电泳仪(EPS-301)(Amersham，瑞典)。

    1.2 HPDLCs的培养与鉴定：取西安交通大学口腔医院口外门诊12～18岁健康青少年因正畸拔除的第一前磨牙，刮取牙根中1/3的牙周膜组织后剪碎，1 200r/min离心5min，弃上清，加入2g/L的I型胶原酶1～2mL，吹打混匀，置于37℃恒温箱中消化30min，每隔5min振荡摇匀一次。当肉眼观察到液体浑浊，组织块明显变小时加入含FBS150mL/L的DMEM培养液终止消化，1 200r/min离心5min，弃上清，加入DMEM培养液重悬后置于塑料培养瓶中，37℃、50mL/L CO2培养箱中培养。24h后加培养液至3mL，获得原代细胞，每3～4天换液。将细胞传至第4代备用，以波形丝蛋白抗体和角蛋白抗体染色鉴定细胞。

    1.3 HPDLCs静压力加载模型的建立：实验用传代培养的第四代人牙周膜细胞，等细胞生长至对数生长期时，全量更换培养液，培养12h，把细胞培养瓶放入压力加载装置的密闭容器里，旋松培养瓶盖；调整容器内温度为37℃，检查装置后，对各实验组施加0、50、100、150、200Kpa的持续静压力作用0、0.5、1、1.5、2、4、6、12h，加力完成后立即收集细胞和条件培养液。-70℃冰箱保存。(吴承琼 周 洪 王晓荣)

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/paper/1008-6455/2009/02/27.htm