刺蒺藜血清对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响(2)
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1.6.6 黑素合成含量测定[6-7]：采用NaOH裂解法，黑素细胞接种方法同上，设立对照组同前。药物作用48h后，弃上清液，弃上清液，用不含Ca2+和Mg2+的PBS液洗2遍，然后加入100μl1N NaOH(含10%DMSO)在37℃水浴保温2h，用酶标仪测定490nm波长的吸光度值，用吸光度值表示黑素含量。
1.7 统计学方法：利用SPSS13.0统计软件进行方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 含药血清对B16黑素瘤细胞增殖的影响：结果见表1。五组含药大鼠血清作用于黑素瘤细胞于48h后，经方差分析五组间差异有显著性(F=21.983，P<0.01)。与空白组比较，低剂量组有明显抑制细胞增殖作用(P<0.01)，高剂量组及阳性对照组有明显促进细胞增殖作用(P<0.01，P<0.05)；中剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性对照组相比较，低剂量组具有明显抑制细胞增殖作用(P<0.01)，高剂量组及中剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。
2.2 含药血清对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响：结果见表2。五组含药大鼠血清作用于黑素瘤细胞48 h后，经方差分析五组间差异有显著性(F=14.349，P<0.01)。与空白组比较，低剂量组有明显抑制细胞增殖作用(P<0.01)，高剂量组及阳性对照组有明显促进细胞增殖作用(P<0.01，P<0.05)；中剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性对照组相比较，低剂量组具有明显抑制细胞增殖作用(P<0.01)，高剂量组及中剂量组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。
3讨论
传统的中药药理体外实验，是将单味中药或复方制剂直接加入到体外细胞反应体系中进行，这种方法本身存在一些弊端。比如：中药绝大部分情况下是口服给药,在经过胃肠道和肝脏代谢后,最后进入血液的并不完全是原药成分，而且中药本身由多种成分组成,这种多成分的整体效应并非等于各部分效应之和，其提取物的理化性质不十分恒定，有可能对体外实验产生干扰作用，必然导致离体反应体系生理活性的改变，从而影响实验结果的正确性、真实性和可靠性，影响药效的判断和评价。
本研究模拟体内环境采用中药血清药理学研究方法进行，研究含药血清对体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。结果显示，白蒺藜低、中、高三种给药剂量大鼠血清对黑素瘤细胞增殖及黑素合成的作用不同。高剂量组血清(30g)对黑素瘤细胞增殖及黑素合成具有促进作用，低剂量组血清(10g)对黑素瘤细胞增殖及黑素合成具有抑制作用，而中剂量组血清(20g)对黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响倾向于促进作用，但其促进作用不明显，这与不同浓度白蒺藜水提物表现出对酪氨酸酶活性的双向调节作用以及白蒺藜血清对酪氨酸酶活性的双向调节作用[1-2]相一致。综合我们的实验结果，提示刺蒺藜对色素代谢的调节与剂量密切相关，刺蒺藜的双向调节作用在临床上治疗色素代谢障碍性皮肤病时值得借鉴。当然，刺蒺藜双向调节作用的内在机理以及如何把握刺蒺藜浓度的临界点等关键问题仍有待更深入的研究，解决这些问题将对临床使用白蒺藜治疗色素代谢障碍性疾病会有更好的指导作用。
[参考文献]
[1]邓燕,杨柳.不同浓度的中药刺蒺藜对黑素细胞和酪氨酸酶的作用[J].第一军医大学学报,2002,22(11)∶1017-1019.
[2]杨柳,赖梅生,蔡红兵.白蒺藜血清对酪氨酸酶活性的双向调节作用[J].陕西中医,2005,26(4)：370-373.
[3]吴水生,张小如,阮时宝.血清药理学研究中含药血清是否需灭活的探讨[J].福建中医学院学报,2001,11(2):45-46.
[4]Im SJ,Kim KN,Yun YG,et al.Effect of Radix Ginseng and Radix Trichosanthis on melanogenesis stimulation in murine B16 melanoma cells by umberiferae plant extracts and their coumarin constituents[J] ......
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