刺蒺藜血清对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响(1)
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[摘要]目的：探讨刺蒺藜血清对黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法：体外培养小鼠B16黑素瘤细胞，制备大鼠含药血清，分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和NaOH裂解法检测细胞增殖及黑素含量。结果：刺蒺藜对黑素细胞增殖及黑素含量具有低剂量(10g)抑制、高剂量(30g)促进作用(P<0.01)，中剂量(20g)对细胞增殖及黑素含量的影响倾向于促进作用, 但与空白对照组比较无统计学意义。结论：刺蒺藜对黑素细胞增殖及黑素含量的影响与剂量有关, 具有低浓度抑制, 高浓度激活的双向调节作用。
[关键词]刺蒺藜；含药血清；细胞增殖；黑素合成
[中图分类号]R758[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2011)01-0063-03
Effects of serum containing Tribulus terrestris on proliferation and melanogenesis in cultured B16 melanoma cells
YANG Liu,XIE Jia-bao,HONG Xun-qiang,LIU Li-li,MA Ling-ling
(Department of Dermatology, Integrative Medicine Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510315, Guangdong,China)
Abstract:ObjectiveTo observe the effects of serum containing Tribulus terrestris on proliferation and melanogenesis in B16 melanoma cells.MethodsB16 melanoma cells was cultured in vitro.Serum containing Tribulus terrestris was prepared.MTT and NaOH method were used to detect proliferation and melanogenesis respectively.ResultsThe serum containing Tribulus terrestris increased the amount of melanin at higher concentrations (30g) but acted to the reverse effect at lower concentrations(10g) (P<0.01).Compared with blank control group，The amount of melanin at middle concentrations (20g) had no significant difference (P>0.05). Conclusionsthe effects of serum containing Tribulus terrestris on proliferation and melanogenesis in B16 melanoma cells correlated with the concentration of Tribulus terrestris.It presented a two-way regulation on proliferation and melanogenesis in cultured B16 melanoma cells.
Key words：Tribulus terrestris；serum containing；proliferation ；melanogenesis
色素障碍性疾病是临床上常见的皮肤病之一，而黑素细胞产生的黑素是决定皮肤颜色的主要因素。刺蒺藜作为治疗色素障碍性疾病的常用药物，我们既往的研究发现不同浓度刺蒺藜水提物以及含药血清对酪氨酸酶(TYR)活性有高浓度激活, 低浓度抑制的作用[1-2], 提示临床治疗不同色素代谢性疾病时刺蒺藜的用量应有所不同。为进一步研究这一问题, 我们采用中药血清学方法研究低、中、高三种给药剂量所制备的大鼠血清对B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响，旨在为刺蒺藜治疗色素性皮肤病的理论研究提供科学的实验依据。
1材料和方法
1.1 黑素瘤细胞株及来源：人A375黑素瘤细胞株由中国科学院上海细胞研究所提供。
1.2 试剂：MTT(四甲基偶氮唑蓝)、二甲基亚砜(DMSO)、0.25%胰蛋白酶-EDTA(美国Sigma公司)，DMEM培养液(高糖)、10%胎牛血清(美国Gibco公司)，其它试剂均为国产分析纯。
1.3 实验药物：①实验用药材刺蒺藜购自南方医科大学南方医院中药房，经南方医科大学中医系中药教研室严格鉴定；②补骨脂素(甲氧沙林片)由重庆华邦制药有限公司馈赠, 批号：20021201。
1.4 实验动物：清洁级wistar雌性大鼠，体重200～250g，购自南方医科大学实验动物中心。
1.5 主要仪器：倒置显微镜(Nikon公司)，自动酶标仪(芬兰Thermo公司)等。
1.6实验方法
1.6.1 中药水提取液的制备：刺蒺藜100g经鉴定后置砂锅内, 加相当于药材量的8倍的蒸馏水浸泡2h ......
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