补益营卫对衰老小鼠皮肤组织tPA表达的影响(2)

http://www.100md.com 2011年7月1日 周小平 马艳红 傅延龄

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    参见附件(2026KB，3页)。

     通过安装在B×51正置荧光显微镜上的照相系统以及计算机Image-pro plus 5.1图像分析软件对TPA免疫组织化学显色结果进行拍照和分析。拍照时每剂量组显色组织切片20倍物镜下随机选取18处视野进行拍照存档，测量时用Image-pro plus 5.1图像分析软件以统一的光密度(Density,简称为D)阈值作为测量指标，以光密度值平均值的高低作为衡量各组皮肤TPA蛋白表达的尺度。

    1.4数据统计：数据资料均采用均数±标准差(x±s)表示，数据进行方差齐性检验后用t检验进行多组均数的两两比较。

    2结果

    正常小鼠皮肤tPA在角质层以下表皮细胞弱表达，毛囊上皮细胞、皮脂腺细胞有较强棕黄色颗粒表达，真皮成纤维细胞未观察到表达(见图1A)。模型组小鼠tPA在角质层以下表皮细胞、毛囊上皮细胞、皮脂腺细胞均强表达(见图1B)。给与维生素E后，tPA在角质层以下表皮细胞、毛囊上皮细胞、皮脂腺细胞的表达明显减弱(见图1C)。经补益营卫处理后，tPA在角质层以下表皮细胞、毛囊上皮细胞、皮脂腺细胞的表达也明显减弱(见图1D、E、F)。图像分析显示：造模后tPA表达水平明显增加，与各组相比有显著统计学差异(P<0.01)；经补益营卫处理后高、中、低三个剂量组均降低tPA水平，与模型组相比有显著性差异，但是三个剂量组之间没有明显差异(P>0.05)。VE可使增加的tPA降低，与模型组相比有统计学差异(P<0.01)。见表1。

    3讨论

    3.1 《伤寒论·平脉法》58条中说：“寸口脉缓而迟，缓则阳气长，其色鲜，其颜光，其声商，毛发长；迟则阴气盛，骨髓生，血满，肌肉紧薄鲜硬。阴阳相抱，荣卫俱行，刚柔相得，名曰强也。”在第69条说：“寸口脉微而涩，微者卫气衰，涩者荣气不足，卫气衰，面色黄，荣气不足，面色青。荣为根，卫为叶，荣卫俱微，则根叶枯槁……”指出营卫充盛，则肌肉健壮，容光焕发，没有衰老之象；反之，营卫不足，则面色青黄，衰象显露[1]。因此，衰老时皮肤腠理变薄、粗糙，含水下降，皮肤屏障容易破坏，这些变化与营卫的盛衰有密切的关系。

    3.2Astrup和Permin于1947年首先在哺乳动物的组织中发现有一种物质能够激活纤溶酶原溶解纤维蛋白的物质。其后，Todd用组织化学的方法发现它存在于许多组织的VEC中，后来被命名为tPA(tissue type plasm inogen activator)[3]。tPA存在于正常皮肤中，并在许多皮肤疾病中异常表达，如鸡眼、银屑病、黑素瘤、压迫性溃疡、瘢痕疙瘩等。亦与细胞与器官衰老关联[4-8]。tPA也是涉及表皮分化的表皮蛋白酶[9]，主要在表皮角质层以下、毛囊及部分汗腺表达[10]。衰老时tPA在表皮及毛囊的表达增加，可能是衰老皮肤粗糙、干燥、瘙痒及脱屑增加的病理基础。

    3.3我们在先前的研究中发现补益营卫能够改善皮肤衰老状态[11]。本试验中拟进一步通过观察衰老皮肤中tPA的活性，以探讨补益营卫对其的影响。实验研究发现，在D-半乳糖小鼠皮肤衰老模型中，衰老皮肤中tPA表达明显增加，与其它各组相比有显著统计学意义(P<0.01)；经补益营卫及维生素E处理后tPA表达水平显著降低(P<0.01)，说明补益营卫及维生素E有抑制衰老皮肤tPA活性增加的作用。这一作用是补益营卫改善衰老皮肤状态的一个重要机制。

    [参考文献]

    [1]周小平,傅延龄.营卫与皮肤及皮肤衰老的关系探讨[J].四川中医, 2008,26(4):22-23.

    [2]Halliwell B，Gutteridge JMC.Free radieals in biology and medicine[J].3rded.Newyork:Oxford University Press,1999:617.

    [3]邵延坤,饶明俐.组织型纤溶酶原激活物及其抑制物与缺血性脑血管病[J].中风与神经疾病杂志,2002,19(3):188-190.

    [4]Ghanshyam D H, Lee K. Roberts. Role of tissue-type plasminogen activator in salicylic acid-induced sloughing of human corn tissue[J]. J Am Podiatr Med Assoc,2008, 98(5): 345-352.

    [5]Comi P,Chiaramonte R,Maier JA.Senescence-dependent regulation of type 1 plasminogen activator inhibitor in human vascular endothelial cells[J].Exp Cell Res,1995,219(1):304- 308.

    [6]Vande Berg JS,Rose MA,Haywood-Reid PL,etal.Cultured pressure ulcer fibroblasts show replicative senescence with elevated production of plasmin, plasminogen activator inh- ibitor-1,and transforming growth factor-beta1[J] ......

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