手部烧伤后瘢痕挛缩的发病机制分析(1)
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[摘要]目的：通过对SKP-2及PTEN的免疫组化变化来分析手部烧伤后瘢痕挛缩的发病机制。方法：选择2009年7月～2011年12月因手部烧伤后瘢痕挛缩在我院住院的患者58例(增生性瘢痕41例，瘢痕疙瘩17例)和非挛缩瘢痕皮肤组织患者30例，采用免疫组化检测三组的SKP-2及PTEN表达情况，并且进行相关性分析。结果：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表达的平均光密度值也明显高于非挛缩瘢痕组织(P<0.05)。瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的PTEN表达的平均光密度值也明显少于非挛缩瘢痕组织(P<0.05)。不同组织中SKP-2和PTEN表达呈现负相关。结论：手部烧伤后瘢痕挛缩在临床上比较常见，SKP-2和PTEN蛋白共同参与了瘢痕挛缩发生、发展过程，而且互为影响，从而有可能为瘢痕挛缩的治疗提供新的思路。
[关键词]手部烧伤；瘢痕挛缩；发病机制；SKP-2；PTEN
[中图分类号]R644 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)08-1328-03
瘢痕挛缩是以肢体或器官的功能受到影响而划分的一类瘢痕表现形式，它不仅有明显的功能障碍，也存在明显的外观改变，包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，多发生于手部。多见于较大面积的烧伤肉芽创面愈合后，瘢痕深而厚，范围较大。也可见于外伤较深跨越关节部位的直线瘢痕[1]。所以近年来研究与肿瘤相关的基因，以及其所表达的蛋白成为了手部烧伤后瘢痕挛缩的防治研究的一个重要方向[2]。本文为此通过对SKP-2及PTEN的免疫组化变化来分析手部烧伤后瘢痕挛缩的发病机制，现报道如下。
1 资料和方法
1.1 一般资料：选择在我院2009年7月～2011年12月住院的手部烧伤后瘢痕挛缩患者58例，年龄在4～52岁，其中男38例，女20例，伤后6～24月，平均10.9个月。瘢痕类型：增生性瘢痕41例，瘢痕疙瘩17例。同时取住院病人供皮区非挛缩瘢痕皮肤组织病人共30例，年龄23～45岁，其中男18例，女12例。组织块离体后经10%中性甲醛固定、然后常规脱水，包埋于低熔点石蜡中，系列切片，厚度为4μm。三组年龄、性别对比类似(P>0.05)。
1.2 免疫组化方法：鼠抗人PTEN单克隆抗体(福州迈新生物技术公司)。SKP-2兔抗人多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。将选择的将组织切片在60℃恒温箱中烘烤1h、二甲苯中浸泡10min、更换二甲苯后浸泡10min，然后在无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中各浸泡5min；用PBS(北京博奥森生物技术有限公司)洗两次各3min后，在微波炉里加热0.01M枸橼酸盐缓冲溶液至沸腾后，将组织切片放入，停止加热，间隔5min(反复2次)。PBS洗三次各3min。滴加SP试剂盒中的封闭液，置入37℃恒温箱中孵育20min。滴加1：50稀释的一抗，4℃过夜。PBS洗三次各3min。滴加SP试剂盒中的生物素化二抗，置入37℃温箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液，置入37℃温箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。DAB显色。组织切片置于二甲苯中浸泡3min，更换二甲苯后再浸泡3min透明，分别挑选高倍镜视野下的表皮组织、成纤维细胞、血管内皮细胞中黄染区域作为测量区域，测得切片上DAB显色为棕黄色代表阳性的区域的平均光密度值(MOD)，取10个视野的平均值。
2 结果
2.3 相关性分析：用Pearson相关分析法分析SKP-2和PTEN在不同组织中表达的相关性，发现不同组织中SKP-2和PTEN表达呈现负相关，相关系数为-0.521，具有统计学意义(P<0.05)。具体情况见图1。
3 讨论
近10年来，烧伤的发生率在世界范围内总体呈上升的趋势。2004年，美国烧伤患者达23.22万，治疗总费用达111.3亿美元[3]。手部烧伤后瘢痕挛缩是深度皮肤软组织创伤后的一种病理性修复结果，轻者影响患者手部状况，严重者可导致手部残疾。影响瘢痕形成的因素很多，其中瘢痕内缺氧环境起重要作用，组织内缺氧可能是诱发增生性瘢痕的关键因素[4-5]。在创面愈合过程中，成肌细胞与成纤维细胞联结而成的合胞体，使创缘皮肤与创面基底的组织相连接，其收缩使创缘带动四周正常皮肤呈向心性收缩，因而创面日益缩小。
SKP-2就是F-box蛋白家族成员之一，能特异性识别磷酸化的底物并介导其泛素化降解，是DNA复制所必需的人类F-box蛋白家族成员[6]。本文结果显示，瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表达的平均光密度值也明显高于非挛缩瘢痕组织(P<0.05)，提示在瘢痕形成中SKP-2起了非常重要的作用，我们推测在烧伤、创伤组织的修复过程中，局部环境发生变化如持续低氧，从而导致了病理性瘢痕中各种细胞的增殖失控，凋亡减少，从而导致了瘢痕的形成[7]。
PTEN蛋白作为双特异磷酸酶，可作用于某些磷脂或蛋白激酶的位点使之脱磷酸化[8]。有报道在PTEN2/2的肿瘤细胞中，PTEN的恢复性表达能够上调P27蛋白的水平，从而诱导细胞G1期阻滞[9]。本实验中发现瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的PTEN表达的平均光密度值也明显少于非挛缩瘢痕组织(P<0 ......
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