大麻素受体CB2在机械牵张力介导的人牙周膜细胞成骨分化中的作用(2)
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1.7 统计分析：采用SPSS12.0统计软件包对数据进行单因素方差分析和t检验，P<0.05认为有显著性差异。
2 结果
2.1 CB2 mRNA在人牙周膜细胞中的表达：Real-time PCR结果见图1。结果显示，施加不同大小的机械牵张力作用于人牙周膜细胞24h，CB2 mRNA的表达随机械牵张力的力值增大而显著性增加(P<0.05)，在18%拉伸应变率作用下表达量最高(P<0.05)。
2.2 CB2 蛋白在人牙周膜细胞中的表达：细胞免疫荧光化学技术检测结果见图2。结果显示，施加18%拉伸应变率的机械牵张力作用于人牙周膜细胞24h，CB2 蛋白的表达显著增加。
3.3 机械牵张力作用下，人牙周膜细胞ALP活性：如图3所示，加入CB2激动剂HU-308后，施加18%拉伸应变率的机械牵张力作用人牙周膜细胞24h， ALP活性显著性增高(P<0.05)；然后再加入CB2抑制剂SR144528，ALP活性显著性降低(P<0.05)。
3 讨论
内源性大麻素(canabinoid，CB)系统包括大麻素受体、其内源性配体以及大麻素合成、降解酶。生物体内存在大麻素I型受体(cannabinoid receptor I，CB1)和大麻素II型受体CB2，这两型大麻素受体都属于G蛋白耦联受体。CB1主要分布在中枢神经系统，包括大脑与脊髓；而CB2主要分布于外周[6]。近几年来骨代谢研究领域最重要的发现之一是证实骨组织内存在着内源性大麻素系统。CB2与其配体(CB2激动剂)结合通过以下机制维持骨量：①直接促进成骨细胞分化及功能表达；②直接抑制破骨细胞分化及功能表达，或通过抑制成骨细胞表达的破骨细胞分化因子(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)来间接抑制破骨细胞[7]。
我们前期的研究结果证实：人牙周膜细胞表达大麻素受体CB2。CB2与其配体结合能够促进人牙周膜细胞成骨标志物的表达，从而证明： CB2能够促进人牙周膜细胞的成骨分化[5]。本实验进一步研究了机械牵张力对CB2在人牙周膜细胞中表达的影响以及CB2在机械牵张力介导的人牙周膜细胞成骨分化中的作用。
本实验发现：CB2在人牙周膜细胞中的表达与机械牵张力的力值具有相关性。这说明CB2是一种对机械牵张力敏感的基因，那么它在机械牵张力介导的牙槽骨改建中究竟发挥什么作用？进一步的实验发现：在机械牵张力作用下，CB2与其配体(CB2激动剂)结合能够增加ALP活性。ALP广泛分布于体内几乎所有器官，是骨形成所必需的酶，通过水解磷酸酯、破坏矿化抑制剂及作为钙结合蛋白和磷酸基的转运子而促进矿化。作为生物矿化和成骨样细胞的一种特征性标记，其活性的高低可反映相应细胞向成骨方向分化的趋势。以往的研究发现：人牙周膜细胞在机械牵张力作用下ALP活性升高，成骨标志物表达增加[3-4]。因此，本实验结果说明：在机械牵张力作用下，CB2与其配体结合能够促进人牙周膜细胞的成骨分化，从而在正畸牙槽骨改建中发挥重要作用。目前国内外的研究仅限于大麻素系统对骨代谢的调控作用和牙周炎时促进牙周组织愈合的作用[7-10]，关于CB2在机械牵张力作用下人牙周膜细胞成骨分化中的作用尚未见报道。我们将继续深入地进行研究，以期为完善正畸临床理论以及相关骨生物力学理论作出贡献。
[参考文献]
[1]Pavlin D，Gluhak-Heinrich J. Effect of mechanical loading on periodontal cells[J].Grit Rev Oral Biol，2001，12：414-424.
[2]Meikle MC.The tissue， cellular， and molecular regulation of orthodontic tooth movement： 100 years after Carl Sandstedt[J]. European J Orthodontics，2006，28：221-240.
[3]Wescott DC，Pinkerton MN，Gaffey BJ，et al.Osteogenic gene expression by human periodontal ligament cells under cyclic tension[J].J Dent Res，2007，86：1212-1216.
[4]Kawarizadeh A，Bourauel C，G？tz W，et al.Early responses of periodontal ligament cells to mechanical stimulus in vivo[J].J Dent Res，2005：84：902-906.
[5]Qian H，Zhao Y，Peng Y，et al.Activation of cannabinoid receptor CB2 regulates osteogenic and osteoclastogenic gene expression in human periodontal ligament cells[J] ......
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