陈明娟，王原路，侯 刚

    ·基础研究·

    毛囊细胞移植治疗秃发疾病的实验基础研究

    陈明娟1，王原路1，侯 刚2

    (1.广州市第一人民医院整形外科广东 广州510180；2.中山大学附属岭南医院骨科广东 广州510515)

    目的：探索细胞移植诱导毛发再生模式，为毛囊细胞移植奠定实验基础。方法：利用酶消化法分离培养绿色荧光蛋白转基因鼠的表皮细胞和真皮细胞，分别进行体外培养扩增至第三代后注射移植入裸鼠皮下，观察其毛囊诱导能力。结果：表皮细胞移植无法诱导毛囊发育；真皮细胞移植仅诱导形成毛囊样结构；混合细胞移植能够诱导毛囊及毛干发育。结论：混合细胞培养可作为毛囊细胞体外培养模型，为毛囊细胞移植提供良好供体。

    真皮细胞；细胞培养；毛囊；诱导；细胞移植

    全球脱发治疗新进展研讨会曾公布调查结果显示：世界上大约有50%成年男性受到脱发困扰，脱发现象遍及世界各个地区各个民族。然而目前的治疗方法无法从根本上解决脱发这一难题，因此细胞移植诱导毛囊再生成为近年来研究的重点。已证实的同毛囊再生具有密切关系的细胞包括毛乳头细胞(Dermal papilla cells，DPCs)和毛囊干细胞(hair follicle stem cells，HFSCs)，并能够进行体外扩增，为细胞移植提供大量的种子细胞。但是通过何种培养方式，能够获得大量具有毛囊诱导能力的种子细胞成为毛囊再生的首要问题。因此，本研究我们将探索细胞培养模式对毛囊发育的影响，最终确立一种科学的培养模型进行体外培养，从而为毛囊的正常发育提供稳定的环境，为毛囊组织工程重建和毛发移植的临床应用奠定实验和理论基础。

    1 材料和方法

    1.1实验动物与试剂：4～6周龄裸鼠，绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠各一只，由南方医科大学实验动物中心提供。I型胶原酶、中性蛋白酶、胰酶(GIBCO公司)；磷酸盐缓冲液(PBS)(SIGMA公司)；胎牛血清(杭州四季青公司)；DMEM 高糖培养基，青、链霉素(杭州吉诺公司)；成纤维细胞生长因子FGF-2(SIGMA公司)；CD34、CD44、CD133(bs-0395R，BIOS公司)。

    1.2种子细胞的分离与培养：取生后第1天的GFP转基因鼠1只，取其背部皮肤约0.5cm×0.5cm组织块，用0.1%中性蛋白酶4℃消化过夜。PBS(含1%青、链霉素)漂洗3次，用显微镊将表皮和真皮分离。分别剪碎，表皮用0.25%胰酶37℃消化10min，真皮以0.2%胶原酶37℃孵育约30min，直至所有组织被消化 ......