张 蓉，高 瞻，倪前伟，王荣耀

    基础研究?

    可注射间充质干细胞膜片修复兔颅骨极限缺损的实验研究

    张 蓉，高 瞻，倪前伟，王荣耀

    (新疆军区总医院颌面外科 新疆 乌鲁木齐 830000)

    目的：评价使用可注射骨髓间充质干细胞(marrow stromal cells，MSCs)膜片修复兔颅骨极限缺损的成骨能力。方法：将体外分离培养扩增的兔MSCs，使用成骨诱导培养液连续培养2周, 形成细胞膜片。采用16只大白兔构建兔颅骨极限缺损模型，随机分为两组，每组8只。实验组，颅骨缺损处注射MSCs膜片；对照组，颅骨缺损处不植入任何材料，分别于术后8周和l2周取材，通过大体观察、X线摄片及组织学检查分析其修复颅骨缺损的效果。结果：体外构建的MSCs膜片为细胞-细胞外基质聚合体，茜素红染色见膜片中细胞外基质内有钙化结节沉积，扫描电镜可见膜片内丰富的胶原纤维和矿化结节聚集。细胞膜片植入兔颅骨缺损，8周时形成组织工程骨，12周时缺损得到完全的骨修复，而对照组仅见纤维组织形成。结论：成骨性MSCs膜片具有良好的骨修复能力。

    骨组织工程；间充质干细胞；细胞膜片技术；颅骨极限缺损

    由于创伤、炎症和肿瘤等因素所致的骨缺损是引发肢体功能丧失的主要原因。尽管自体骨移植是治疗局部骨缺损的金标准，但是该方法由于取骨部位和数量的限制难以应用于较大的骨缺损。异体和异种骨移植，愈合过程漫长且存在不同程度的免疫排斥反应。随着组织工程学的崛起和不断发展，有望为骨修复与重建开辟新的途径。但研究发现，传统的“细胞-支架材料”策略，存在一些缺陷，如接种细胞大量流失、接种效率有限；细胞主要黏附于材料的表面而呈“渔网样”分布不均；常用的蛋白酶消化收集细胞，易改变细胞的表型和生化成分，也常常破坏细胞外基质和细胞间连接蛋白[1]。此外，现有的支架材料也不能完全满足构建组织的需要，存在潜在的免疫源性、生物活性不足，还可能由于不完全降解而形成纤维组织等问题[2-3]。

    近年来出现的细胞膜片技术，提供了一种新的组织再生方法。它采用物理方法收获完整的膜片状形式的细胞-细胞外基质聚集体，转运或是粘附于材料表面，成为一个良好的骨构建单位。利用此技术已成功构建出骨、心肌、角膜、食管上皮等组织[4-6]。本实验，旨在探讨单纯MSCs膜片的正位成骨能力，实验将细胞膜片直接注射入兔颅骨极限缺损内，术后8周和l2周取材，通过大体观察、X线及组织学检查分析其骨修复效果。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物：3月龄清洁级新西兰大白兔16只 ......