傅 云，廖 建，张 琼，王冬梅，王业秋，李建民，张丽宏

    (1.黑龙江中医药大学 黑龙江 哈尔滨 150040；2.四川省中西医结合医院 四川 成都 610041；3.内江市中医医院 四川 内江 641000)

    近年来，随着工业化生产的快速发展，环境污染日益加重，臭氧层阻挡紫外线(ultraviolet, UV)的能力减弱，辐射至地球表面的UV逐渐增多[1]。中波紫外线(UVB)波长为290～320nm，长时间接受过度的UVB辐射将导致皮肤光损伤，引发一系列形态学、组织学及生理学转化[2-3]，导致皮肤皱缩、无弹性、无光泽，严重可致色素沉着及恶性肿瘤发生[4]。长期的UVB辐射引起的炎症反应、氧化应激、DNA损伤和细胞凋亡等是直接导致皮肤光老化的重要机制[5]，同时UVB辐射导致大量活性氧自由基(ROS)堆积于体内，可诱导凋亡相关蛋白的表达，加速细胞凋亡的发生[6]。UVB主要影响人体皮肤表皮细胞，表皮细胞大部分由角质形成细胞(human keratinocytes, HaCaT)组成[7]。研究表明[8]，当UVB照射剂量为30mJ/cm2时，即可导致人皮肤HaCaT细胞光损伤，并且发生凋亡和坏死。甘草酸是甘草根部提取物中含量较高的重要活性成分之一，具有抗炎、抗氧化、抗过敏、调节免疫、抑制黑色素沉着、抗癌等功效[9]。此外，甘草酸还具有一定的光热稳定性，可减轻紫外线辐射造成的皮肤光损伤[10]。目前，对于甘草酸通过自身抗氧化、抗炎等药理作用保护皮肤光老化的研究较多，而对于甘草酸能否抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡及其相关机制尚不明确。因此，本实验应用总剂量为30mJ/cm2的UVB诱导HaCaT细胞凋亡，用不同浓度的甘草酸作用于HaCaT细胞，探讨甘草酸对UVB诱导HaCaT细胞凋亡的影响及相关机制。

    1 材料

    1.1 细胞株：人皮肤角质形成细胞(HaCaT)(上海中乔新舟有限公司，批号ZQ0044)。

    1.2 药物和试剂：甘草酸标准品(成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-16081812)；Annexin-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20170524)；AMV第一链cDNA合成试剂盒(生工生物工程有限公司，批号B532445)；SGExcel UltraSYBR Mixture(With ROX)(生工生物工程有限公司，B532956)；羊抗兔二抗(博士德生物有限公司，批号BA1054)；兔抗人β-肌动蛋白(β-actin)单克隆抗体，兔抗人Caspase-3、Caspase-9多克隆抗体(博奥森生物有限公司 ......