miR—let—7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡(1)
[摘要]目的：探讨miR-let-7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡。方法：qPCR法检测miR-let-7b在黑色素瘤组织和细胞株中的表达情况；双荧光素酶报告基因检测miR-let-7b与CCND1之间的相互作用；MTT增殖实验检测抑制miR-let-7b后黑色素瘤细胞的增殖能力的变化情况；流式细胞术检测抑制miR-let-7b后黑色素瘤细胞的凋亡行为的变化情况。结果：与癌旁正常皮肤组织相比，黑色素瘤组织中miR-let-7b的表达水平相对上调，与其他黑色素瘤细胞株相比，A375细胞中miR-let-7b表达最高；双荧光素酶实验证实miR-let-7b能与CCND1的3’UTR特异性结合，可以调控CCND1的表达与活性；抑制miR-let-7b的表达后可以抑制黑色素瘤细胞的增殖能力；同时可以促进黑色素瘤细胞的凋亡行为。结论：miR-let-7b可以调控CCND1的表达从而影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡。
[关键词]miR-let-7b；黑色素瘤；CCND1；凋亡；增殖
, http://www.100md.com
[中图分类号]R739.5 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)07-0079-04
Abstract： Objective To investigate the effect of miR-let-7b on the proliferation and apoptosis of melanoma by regulating related cell cycle proteins. Methods Expression of miR-let-7b in melanoma tissues and cell lines was detected by qPCR. Double luciferase reporter gene was used to detect the interaction between miR-let-7b and CCND1. MTT proliferation assay was used to detect the proliferation of melanoma cells after inhibition of miR-let-7b. Flow cytometry was used to detect the apoptotic behavior of melanoma cells after inhibition of miR-let-7b. Results Compared with adjacent normal skin tissue， the expression level of miR-let-7b in melanoma tissue was relatively up-regulated. Compared with other melanoma cell lines， the expression of miR-let-7b was the highest in A375 cells. Double luciferase assay confirmed that miR-let-7b could specifically bind to the 3' UTR of CCND1 and regulate the expression and activity of CCND1. miR-let-7b can inhibit the proliferation of melanoma cells， And can promote the apoptosis of melanoma cells. Conclusion miR-let-7b can regulate the expression of CCND1 and affect the proliferation and apoptosis of melanoma cells.
, 百拇医药
Key words： miR-let-7b； melanoma； CCND1； apoptosis； proliferation
皮肤黑色素瘤是一种以侵袭性转移生长和预后不良为特征的皮肤恶性肿瘤[1]。黑色素瘤的发病率一直居高不下，且晚期患者的死亡率较高[2-3]。转移性黑色素瘤患者的中位生存时间为6个月，5年生存率低于5%[4]。遗传因素和过多的紫外线照射是黑色素瘤的主要危险因素[5]。研究探讨黑色素瘤的分子生物学发病机制有助于提高其临床诊断率和治療情况。微小RNA是在哺乳动物体内发现的一类小型非编码RNA，长度约为22～26个核苷酸[6]。miRNA通过不完全的碱基配对来调节基因表达过程，抑制非翻译区(3'-UTR)的结合进而影响mRNA表达稳定性[7]。相关研究数据表明，从核苷酸3'到5'端的核苷酸种子序列称为miRNA末端靶标，miRNA末端靶标通常在3'端具有相应的种子结合位点，然而单个miRNA可以调节数百个基因的表达，分子靶标之间的识别系统变得尤为重要[8]。重要的是，miRNA靶位点通常在许多物种的基因组中进化保守，这表明miRNA和蛋白的相互作用在生物学功能和行为上具有重要意义。最近的研究表明多种miRNA的表达失调在人类恶性肿瘤的发展过程中起重要作用，而且根据特异性miRNA和肿瘤类型，miRNA可以作为肿瘤抑制因子或致癌基因，具有明显的组织特异性[8]。但是在黑色素瘤中的具体作用方式尚未阐述清楚。本研究，首先检测了miR-let-7b在黑色素瘤组织和细胞株中的表达水平，然后通过流式细胞术检测其对黑色素瘤细胞增殖和凋亡行为的影响，明确细胞周期蛋白CCND1和miR-let-7b之间相互关系，为miRNA在黑色素瘤中的作用机制提供一定的理论支持。
1 材料和方法
1.1 标本来源：收集2016年7月-2017年1月在笔者医院行手术切除且经病理检查确诊为皮肤黑色素瘤的组织60例，同时取癌旁正常皮肤组织60例。离体后放入4%多聚甲醛中固定。全部患者术后病理分期均经2名副高以上病理科医师共同阅片确定，所有患者术前无化疗或放疗，黑色素瘤组织为原发病灶并经病理科证实，均自愿签署知情同意书。将60例黑色素瘤组织和相应配对的癌旁正常皮肤组织进行随机分组，分为5组，分别是S1，S2，S3，S4，S5，检测随机分组后肿瘤组织和癌旁正常组织中miR-let-7b的表达情况。, 百拇医药(秦琴 宁花兰 陈小燕)
[关键词]miR-let-7b；黑色素瘤；CCND1；凋亡；增殖
, http://www.100md.com
[中图分类号]R739.5 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455(2018)07-0079-04
Abstract： Objective To investigate the effect of miR-let-7b on the proliferation and apoptosis of melanoma by regulating related cell cycle proteins. Methods Expression of miR-let-7b in melanoma tissues and cell lines was detected by qPCR. Double luciferase reporter gene was used to detect the interaction between miR-let-7b and CCND1. MTT proliferation assay was used to detect the proliferation of melanoma cells after inhibition of miR-let-7b. Flow cytometry was used to detect the apoptotic behavior of melanoma cells after inhibition of miR-let-7b. Results Compared with adjacent normal skin tissue， the expression level of miR-let-7b in melanoma tissue was relatively up-regulated. Compared with other melanoma cell lines， the expression of miR-let-7b was the highest in A375 cells. Double luciferase assay confirmed that miR-let-7b could specifically bind to the 3' UTR of CCND1 and regulate the expression and activity of CCND1. miR-let-7b can inhibit the proliferation of melanoma cells， And can promote the apoptosis of melanoma cells. Conclusion miR-let-7b can regulate the expression of CCND1 and affect the proliferation and apoptosis of melanoma cells.
, 百拇医药
Key words： miR-let-7b； melanoma； CCND1； apoptosis； proliferation
皮肤黑色素瘤是一种以侵袭性转移生长和预后不良为特征的皮肤恶性肿瘤[1]。黑色素瘤的发病率一直居高不下，且晚期患者的死亡率较高[2-3]。转移性黑色素瘤患者的中位生存时间为6个月，5年生存率低于5%[4]。遗传因素和过多的紫外线照射是黑色素瘤的主要危险因素[5]。研究探讨黑色素瘤的分子生物学发病机制有助于提高其临床诊断率和治療情况。微小RNA是在哺乳动物体内发现的一类小型非编码RNA，长度约为22～26个核苷酸[6]。miRNA通过不完全的碱基配对来调节基因表达过程，抑制非翻译区(3'-UTR)的结合进而影响mRNA表达稳定性[7]。相关研究数据表明，从核苷酸3'到5'端的核苷酸种子序列称为miRNA末端靶标，miRNA末端靶标通常在3'端具有相应的种子结合位点，然而单个miRNA可以调节数百个基因的表达，分子靶标之间的识别系统变得尤为重要[8]。重要的是，miRNA靶位点通常在许多物种的基因组中进化保守，这表明miRNA和蛋白的相互作用在生物学功能和行为上具有重要意义。最近的研究表明多种miRNA的表达失调在人类恶性肿瘤的发展过程中起重要作用，而且根据特异性miRNA和肿瘤类型，miRNA可以作为肿瘤抑制因子或致癌基因，具有明显的组织特异性[8]。但是在黑色素瘤中的具体作用方式尚未阐述清楚。本研究，首先检测了miR-let-7b在黑色素瘤组织和细胞株中的表达水平，然后通过流式细胞术检测其对黑色素瘤细胞增殖和凋亡行为的影响，明确细胞周期蛋白CCND1和miR-let-7b之间相互关系，为miRNA在黑色素瘤中的作用机制提供一定的理论支持。
1 材料和方法
1.1 标本来源：收集2016年7月-2017年1月在笔者医院行手术切除且经病理检查确诊为皮肤黑色素瘤的组织60例，同时取癌旁正常皮肤组织60例。离体后放入4%多聚甲醛中固定。全部患者术后病理分期均经2名副高以上病理科医师共同阅片确定，所有患者术前无化疗或放疗，黑色素瘤组织为原发病灶并经病理科证实，均自愿签署知情同意书。将60例黑色素瘤组织和相应配对的癌旁正常皮肤组织进行随机分组，分为5组，分别是S1，S2，S3，S4，S5，检测随机分组后肿瘤组织和癌旁正常组织中miR-let-7b的表达情况。, 百拇医药(秦琴 宁花兰 陈小燕)