1.2.2 壳聚糖支架的制备：参考伍尚敏等[6]壳聚糖备制流程加以改进，在磁力搅拌结束后，将溶液加入12孔细胞培养板孔中，1ml/孔。置于-20℃中过夜，取出后冷冻干燥48 h。用75%乙醇浸泡0.5h灭菌，并剪碎为小颗粒，PBS浸洗3次，15min/次，最后在密封条件下紫外灯照射20min。

    1.2.3 CM-Dil染色：将消化后的细胞用PBS冲洗两次。标记液50?g CM-Dil加入0.025ml二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)，用D-PBS配制为5?g/ml染液，将细胞与染液混合，37℃温箱孵育20min，4℃冰箱孵育15min。标记成功后PBS再次冲洗，用PBS配制成混合悬浊液备用。

    1.2.4 实验分组及手术：随机分为4组：即A组：空白对照组(PBS+ADSCs)、B组：干细胞-SHH组(ADSCs+SHH)、C组：壳聚糖-干细胞组(壳聚糖+ADSCs)、D组：实验组(壳聚糖+SHH+ADSCs)，每组小鼠各5只。将CM-Dil标记的ADSCs与壳聚糖支架及SHH混合，混合物SHH终浓度300?g/L，用注射器吸取ADSCs-SHH-壳聚糖支架，1%戊巴比妥钠70?l/只 ......