miR-4655-3p在中波紫外线旁观者效应中的作用研究(2)
1.2 细胞处理:HSFs于处理前1d以50%的密度均匀种植于6孔板中。转染试剂、miR-4655-3p inhibitor及inhibitor阴性对照购于广州锐博生物科技有限公司,根据说明书配制100nM的转染混合液,并在室温下放置10min。小心将转染混合液滴入细胞培养上清中,放入培养箱中培养。24h后刷新培养基并对细胞进行单次60mJ/cm2 UVB照射,继续于培养箱中培养24h。将此细胞培养上清加入正常HSFs中培养48h。1.3 实时定量PCR:使用Trizol试剂(美国Invitrogen公司)提取总RNA。用茎环法进行miRNA逆转录,U6作为miRNA的内参。使用TB Green嵌合荧光试剂(日本TaKaRa公司)进行实时定量PCR反应。PCR程序使用StepOnePlusTM实时PCR系统,用2-△△Ct值比较分析数据。
1.4 细胞增殖率测定:96孔板中的细胞用转染细胞上清培养48h后,去除上清并用PBS清洗3遍。每孔中加入100?l培养基与10?l CCK8溶液(日本Dojindo公司)并混匀 ......
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