MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究
1.6 MTS法检测细胞增殖能力:调整细胞浓度,以5×103个/孔接种于96孔培养板中,轻轻混匀后,置入37℃,5% CO2培养箱常规培养,于转染成功2d、3d、4d、5d后分别加MTS试剂20μl,37℃避光4h后,弃掉孔内液体,再加DMSO 100μl,置于37℃摇床上快速振荡15min,以便充分溶解结晶物,最后将96孔板置于酶标仪上检测 490nm处的OD值。1.7 Transwell实验检测细胞侵袭:将40μl matrigel基质胶铺于Transwell小室中,37℃静置1h凝固后备用,实验前12h弃原细胞培养液并换成无血清培养基,将细胞消化并用1×PBS清洗,细胞计数后取5×105细胞重悬,取200~250μl细胞悬液至Transwell小室中,下室加入500μl完全培养基,保证下层完全培养基与Transwell小室间无气泡。置于培养箱内培养24h,4%多聚甲醛固定,PBS洗干净,加0.1%结晶紫染液室温避光染色15min,PBS漂洗后用棉棒擦Transwell小室内部,倒置晾干,置于倒置荧光显微镜下观察拍照并计数 ......
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