谢 娜，陆 磊，姬小婷，王丹杨，唐成芳，李子夏，胡 妍，李 旋

    (1.西安医学院口腔医学院 陕西 西安 710021；2.陕西中医药大学附属医院口腔科 陕西 咸阳 712000)

    牙髓再生是目前牙齿组织再生中最具挑战性的课题之一，这是由于牙髓组织稳定的内部结构和自身有限的修复能力所致。随着现代组织工程技术的发展和各种干细胞的发现将为年轻恒牙牙髓坏死的治疗开辟新的研究领域[1]。本实验中利用人乳牙牙髓干细胞(Stem cells derived from exfoliated deciduous teeth，SHED)、生物支架材料聚乙丙交酯(PLGA)、人乳牙牙髓干细胞膜片以及处理过的牙本质基质片段在裸鼠体内进行牙髓再生的实验研究，以期构建出一种适合临床应用的牙髓再生策略，为年轻恒牙发生牙髓坏死的生物学治疗提供新的参考依据。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物：BALB/c裸鼠(上海斯莱克实验动物有限公司购买，西安交通大学医学院动物房饲养)。

    1.2 试剂和器材

    1.2.1 主要试剂：DMEM/F12培养基、胎牛血清(Hyclone，北京)；Ⅰ型胶原酶、Dispase酶(Gibco，美国)；DSPP单克隆抗体(Santa，美国)；PLGA(济南岱罡生物科技有限公司，山东)。

    1.2.2 主要仪器：细胞培养箱(Thermo，美国)；酶联检测仪(Amersham Biosciences，瑞典)；Motic Med 6.0数码医学图像分析系统(厦门麦克奥迪有限责任公司，福建)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 人乳牙牙髓细胞的获取、培养和纯化：选取临床中需要拔除的6～8岁儿童滞留的乳前牙(经伦理审批会审批，拔除前患者签署知情同意书)，在超净台内用PBS液冲洗后拔除牙髓组织，浸泡于1:1混合的Ⅰ型胶原酶和Dispase酶中。将牙髓组织剪成0.5～1 mm3大小的组织块，5% CO2、37℃的细胞培养箱中孵育45～60 min。待组织块完全消化、溶解后转移至离心管中，1 000 r/min离心5 min，弃上清，用含15%胎牛血清的DMEM/F12(培养基中加入100 U/ml青霉素，100 μg/ml链霉素和2 mM的L-谷氨酰胺)培养基重悬细胞，随后移至60 mm培养皿中培养。有限稀释法对所培养的细胞进行克隆纯化。

    1.3.2 牙本质基质片段的制备

    1.3.2.1 实验材料获取：实验所需的牙本质片段来源于临床上5～12岁患者所拔除的多生牙(经伦理审批会审批 ......