脂肪干细胞外泌体传递miR-145调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的实验研究
来源,1材料和方法,2结果,3讨论
阿丽米热·伊力哈木,卡米力江·买买提明,美尔瓦提,李朝阳(新疆维吾尔自治区人民医院 1.整形外科;2.颌面外科;3.临床心理科 新疆 乌鲁木齐 830001)
深部烧伤、严重外伤或感染后皮肤的异常修复均可导致组织内成纤维细胞(Fibroblasts,FB)过度增殖以及增生性瘢痕(Hypertrophic scars,HS)的形成[1-2]。HS会导致严重的畸形及其他不良反应,给患者精神上造成巨大痛苦。尽管目前瘢痕治疗方法较多,但均很难获得理想效果[3]。脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)是一种从脂肪组织中分离出来的重要干细胞类型,具有易获取、多向分化、增殖潜力高和自我更新等特性[4]。外泌体(Exosome,Exo)是径粒大小40~100 nm的细胞外小囊泡,可调节细胞生物学行为,充当细胞间通讯工具[5]。ADSCs来源Exo是ADSCs旁分泌释放的重要成分,具有多种生物学活性。组织再生需要多种生长因子、蛋白酶、祖细胞和产生炎性细胞因子的免疫细胞所组成的协调“网络”,作为细胞间的信使,ADSCs来源Exo能够通过调控成纤维细胞的迁移和增殖、促进新生血管形成以及不同组织中的其他特定功能,从而在组织创伤修复中发挥积极作用[5-6]。microRNA(miRNA)作为特定信使RNA的重要转录后调节因子,参与调节细胞增殖、分化和凋亡。目前,关于miRNA与增生性瘢痕发生发展的关系研究越来越多。研究表明,miR-145在ADSCs来源Exo中过表达能影响细胞的生物学行为进而发挥相关作用,例如促进软骨形成、抑制炎症反应[7],而其在ADSCs来源Exo对人增生性瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic scar fibroblasts,HSF)增殖与凋亡中的功能尚未见报道。鉴于此,本研究以HSF细胞作为研究对象,将过表达miR-145的ADSCs来源Exo与HSF细胞共培养,探究这一体系下HSF细胞增殖与凋亡的变化及具体分子机制,以期为增生性瘢痕的临床治疗研究提供新依据与新方案。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 临床样本:增生性瘢痕组织取自医院整形外科,为烧伤或术后6个月以上的瘢痕患者的瘢痕组织标本。其中男3例,女1例,年龄22~41岁,平均年龄为(27±8)岁。脂肪组织取自医院进行吸脂术的患者,女3例,年龄25~35岁,平均年龄为(27±5)岁。实验前所有患者均被告知了研究目的,获得同意并签署了手术知情同意书。
1.1.2 主要试剂:Ⅰ型胶原酶、青霉素、链霉素和DMEM培养基购于美国GIBCO公司 ......
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