王 晔，于 淼，张 丞，张婉君，马永平

    (保定市第二医院口腔科 河北 保定 071000)

    牙源性干细胞包括牙髓干细胞、牙周膜干细胞以及根尖牙乳头干细胞。牙髓干细胞是一种成体干细胞，一般存在于牙髓组织，具有类似于间充质干细胞的生物学特性，可被诱导分化为成牙本质细胞，具有成骨分化能力，所以对牙周组织再生具有重要作用。体内实验证明，将牙髓干细胞分泌的细胞外囊泡植入大鼠无髓根管，促进牙髓再生，在某些刺激因子作用下，牙髓干细胞可发生牙本质再生[1-2]。BMP-2在骨再生的促进和维持中发挥重要作用，而且是已知的骨诱导性生长因子之一[3]，Han等[4]的体外研究证明，BMP-2失活抑制骨髓间充质干细胞向成骨细胞样细胞分化。将含有人重组BMP-2载体注入颅骨缺损的大鼠体内，可有效促进颅骨愈合，且反复给药并不能增强或减弱愈合能力[5]。BMP信号可激活其受体Smad1/5，Smad1/5信号分子可将细胞因子转导信号由细胞质转至细胞核，调控靶基因转录[6]。研究报道，BMP-2/Smad信号通路与成骨分化密切相关，该信号通路激活不仅改善骨质疏松症，而且可促进骨髓间充质干细胞成骨分化[7-8]。但BMP-2是否可激活Smad1/5在牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中发挥调控作用的研究甚少，因此，本研究以人牙髓干细胞为研究对象，探讨BMP-2对牙髓干细胞成牙本质分化的影响以及对Smad1/5信号通路的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料和仪器：①Smad1/5信号通路抑制剂LDN-193189购自美国Selleck公司；②CCK-8细胞活性检测试剂盒购自日本Dojindo公司；③BCA试剂盒购自德国赛默飞世尔科技公司；④碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)试剂盒购自北京索莱宝科技公司；⑤Trizol试剂盒、反转录试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；⑥p-Smad1/5、Smad1/5、BMP-2和GAPDH抗体购自美国Abcam公司；⑦茜素红购自美国Thermo Fisher Scientifie公司；牙本质基质蛋白1(Dentin matrix protein 1,DMP1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)引物序列由上海生工生物工程股份有限公司合成；⑧可见分光光度计购自上海光学仪器五厂有限公司；⑨酶标仪购自美国Bio-TEK公司；⑩细胞系：人牙髓干细胞(上海研生实业有限公司)。

    1.2 细胞培养与分组：将人牙髓干细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中 ......