[摘要]目的：对利用人表皮干细胞(Human Epidermal stem cells，hESCs)进行3D生物打印的皮肤组织进行初步研究。方法：分离人皮肤样本的表皮层与真皮层，胰酶消化，快速贴壁法分离ESCs，细胞免疫荧光染色及流式细胞仪鉴定其标志分子；MTT法检测完全DMEM培养基、无血清KGM2培养基中ESCs增殖情况；制备3D打印支架材料，以ESCs为种子细胞，采用微挤压3D生物打印技术打印皮肤组织，HE染色观察不同ESCs浓度的3D打印皮肤组织厚度，MTT法检测不同纤维蛋白原浓度对3D打印皮肤组织中细胞活性的影响；HE染色、免疫荧光染色观察3D打印皮肤组织的结构；透皮水分散失(Transepidermal water loss，TEWL)法、甲苯胺蓝渗透法检测3D打印皮肤组织的屏障功能。结果：细胞免疫荧光染色显示，第2代ESCs中β1整合素、角蛋白19阳性表达率>90%；流式细胞仪检测显示，CD71低表达的同时α6整合素高表达的细胞>90%。与完全DMEM培养基比较，ESCs在无血清KGM2培养基中的组24、48、72 h吸光度值均升高(P<0.05)。与2×106/ml比较，4×106/ml、6×106/ml时打印组织厚度增加，4×106/ml、6×106/ml打印组织厚度比较，差异无统计学意义(P>0.05)，选用4×106/ml作为后续ESCs浓度用于打印皮肤。当纤维蛋白原作为支架材料，浓度为5～20 mg/ml时，对ESCs的活性无明显影响。免疫荧光染色显示，3D打印皮肤组织的表皮层、真皮层分层良好。正常皮肤、3D打印皮肤的表皮层厚度、TEWL值、甲苯胺蓝的渗透厚度比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：以人ESCs作为种子细胞，培养于无血清KGM2培养基，5 mg/ml纤维蛋白原作为支架材料，微挤压3D生物打印技术打印皮肤组织，获取的皮肤组织与正常皮肤具有类似的表皮层厚度与屏障功能。

    [关键词]人表皮干细胞(hESCs)；3D生物打印；生物医学工程；皮肤组织；屏障功能

    [中图分类号]R726.2" " [文献标志码]A" " [文章编号]1008-6455(2025)09-0024-06

    Preliminary Study on 3D Bioprinting Skin Tissue Using Human Epidermal Stem Cells

    GUO Shenghong， LIU Guogang， WANG Huaying， XIE Liwei， ZHANG Haiyang

    ( Department of Dermatology ......