HPLC法测定吉祥草中β-胡萝卜素
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2010年1月1日
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【摘要】目的:建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。方法:以丙酮-石油醚(1∶1v/v)的混合溶液浸提吉祥草中β-胡萝卜素。色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速:1.0ml·min-1;柱温20℃;检测波长为450nm。进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察。结果:β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074～0.0666μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.33%,稳定性400分钟内RSD=1.94%。结论:该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法。
【关键词】吉祥草;β-胡萝卜素;高效液相色谱法
【中图分类号】TS207 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455(2010)07-0279-02
HPLC Determination of β-carotene in Reineckia carnea(Andr.)Kunth
Chen Ling Bao Jiake Xu Hong Xiong Huilin Chen Wanli
【Abstract】Objective:A HPLC method was established for the determination ofβ-carotene in Reineckia carnea(Andr.)Kunth. Method:DiamonsilC18 column(200mm×4.6mm,5μm)with a mobile phase composed of Acetonitrile-Methanol-Ethyl Acetate-Triethylamine(80∶10∶10∶0.05)was used. The detection wavelength was 450 nm and the flow rate was 1.0 ml·min-1.Results:The calibration curves were linear between 0.0074-0.0666μg(r=0.9999)Average recoveries was 99.33%(n=6),RSD=1.94%.Conclusion:The method is rapid 、accurate and is suitable for the determination ofβ-carotene in Reineckia carnea(Andr.)Kunth.
【Key words】Reineckia carnea(Andr.)Kunth;β-carotene;HPLC
吉祥草为百合科植物吉祥草Reineckia carnea(Andr.)Kunth.的干燥全草。具有滋阴润肺,凉血止血的功效。主要用于肺燥咳喘,阴虚咳嗽[1]。据报道吉祥草中含有较多的β-胡萝卜素[2],β-胡萝卜素是胡萝卜素的主要组成部分,而大量研究表明胡萝卜素是维生素A的重要来源,具有抗氧化、抗癌、抗辐射、增强免疫力等生理和药用价值[3-4]。目前有关吉祥草中β-胡萝卜素定量研究还未见报道。本研究采用高效液相色谱法,测定吉祥草中β-胡萝卜素,为全面控制吉祥草药材质量提供依据。
1 仪器与试药
紫外可见分光光度仪:岛津UV-2550型分光光度仪;高效液相色谱仪:岛津LC-2010ATH液相色谱仪,LC-solution色谱工作站。色谱柱为DiamonsilC18(200mm×4.60mm,5μm);β-胡萝卜素对照品(100445-200701,含量30.9%)购自中国药品生物制品检定所;吉祥草药材产自贵州省各地,经贵州省药品检验所熊慧林主任药师鉴定为百合科植物吉祥草Reineckia carne(Andr.)Kunth;甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 含量测定[4-8]
2.1.1 检测波长的选择经对β-胡萝卜素对照品溶液进行紫外扫描,发现在450nm处有最大吸收峰。因此选择450nm作为检测波长。
2.1.2 对照品溶液的制备:精密称取β-胡萝卜素对照品适量,加丙酮制成每毫升约含4.0μg的溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备:取吉祥草粉末1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,用丙酮-石油醚(30～60℃)(1∶1v/v)的混合溶液重复浸提至溶液无色,浸提液置抽风橱内自然挥干,残渣用丙酮定溶至10ml,经0.45μm的微孔滤膜滤过,续滤液作为供试品溶液。
2.1.4 色谱条件及含量测定:色谱柱为迪马C18(200mm×4.60mm,5μm),柱温20℃ ;流动相:乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速:1.0ml·min-1;检测波长为450nm。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,进行含量测定。
2.1.5 线性关系考察:精密吸取上述β-胡萝卜素对照品溶液2,6,10,14,18μl注入高效液相色谱仪,依法测定,以峰面积为纵坐标,β-胡萝卜素浓度为横坐标,绘制标准曲线,线性回归方程:Y=12559750.00000x-3712.95000,R2=0.99995。结果表明,β-胡萝卜素在0.0074～0.0666μg范围内具有良好的线性关系,见图1。
2.1.6 精密度考察:取同一对照品,分别重复进样6次,对照品溶液中β-胡萝卜素RSD=1.55%(n=6)。
2.1.7 重复性实验:取吉祥草6份,精密称定,按“样品含量测定”项下的方法操作,制成供试品溶液,测定β-胡萝卜素的平均含量为37.96mg/g,RSD为1.68%。(样品为紫云县产)。
2.1.8 稳定性实验:将配制好的供试品溶液在室温下放置,分别于0,80,160,240,320,400分钟测定,结果样品溶液在400分钟内基本稳定,RSD=1.94%。(样品为紫云县产)。
2.1.9 加样回收率实验:精密称取已知含量的吉祥草共6份,分别加入等量β-胡萝卜素对照品,照供试品溶液的制备方法制备,测定含量,β-胡萝卜素平均回收率为99.33%, RSD=1.23%,(n=6) 。(样品为紫云县产)。
2.1.10 吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定:按“2.1.3”项下方法,制备供试品溶液,测定吉祥草中β-胡萝卜素的含量,测定结果见表2。
3 讨论 ......
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