疏肝和胃丸对胃黏膜损伤大鼠胃组织形态学及黏膜血流量的影响(1)
 |
摘要：目的：观察疏肝和胃丸对大鼠胃黏膜胃组织形态学及黏膜血流量的影响。探讨该方对胃黏膜的保护作用机制。方法：采用冷水一束缚应激性胃黏膜损伤大鼠模型，在预先给予疏肝和胃丸混悬液给动物灌胃7天后，观察胃黏膜损伤指数(UI)、胃组织形态学及胃黏膜血流量(GMBF)的变化。结果：疏肝和胃丸能明显减轻胃黏膜组织镜下的损伤程度。能有效防止因应激引起的GMBF下降。结论：疏肝和胃丸对应激性胃黏膜损伤大鼠胃、黏膜有保护作用。该方胃黏膜保护作用机制可能与增加GMBF有关。
关键词：疏肝和胃丸；预保护；应激性胃黏膜损伤；胃黏膜血流量；柴胡；半夏；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)11-2395-03
疏肝和胃丸是临床使用多年的经验方，对治疗急慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡疗效满意。该方主要由柴胡、姜半夏、柿蒂、乌贼骨、白芍等药组成，具有疏肝和胃、理气止痛之功效。本研究采用预先给予疏肝和胃丸的混悬液灌胃，观察该方对冷水一束缚应激造成的大鼠急性胃黏膜损伤的预保护作用和胃组织形态学及胃黏膜血流量(GMBF)的改变，探讨该方的胃黏膜保护作用机制。现将实验方法及结果报道如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物Wistar大鼠180-220g40只，清洁级，雄性，由湖南中医药大学实验动物中心提供。控制室温20～22℃，给予充足的标准饲料和饮用水，光照充分。
1.1.2 药物和试剂药物：疏肝和胃丸干浸膏粉，每克含生药11.57g，由湖南中医药大学附属第一医院药剂科提供。雷尼替丁胶囊，0.15g/粒，杭州民生药业有限公司。主要试剂：10%乌拉坦(10mL/kg)、乙醚、10%甲醛、无水乙醇、二甲苯、苏木素染液、10%伊红水液、中性树胶。
1.1.3 主要仪器10倍放大镜、显微镜、切片机、麦克奥迪显微镜。
1.2 方法
1.2.1 动物分组方法动物随机分为4组，分别为：A正常对照组简称正常组；B应激模型组简称模型组；C疏肝和胃丸+应激模型组简称疏肝组；D雷尼替丁+模型组简称雷尼组。每组10只。
, http://www.100md.com
1.2.2 动物造模方法参照文献介绍的造模方法，采用水浸束缚应激(WRS)制作应激性溃疡模型。各组动物于造模前禁食不禁水24h，将大鼠束缚于固定器竖立浸入(20±1)℃的恒温水箱中，水面齐大鼠剑突水平，持续10h后取出动物。
1.2.3 给药方法造模前疏肝组每只动物经体表面积换算后将疏肝和胃丸按1.08g/(kg·d)溶于2mL生理盐水中灌胃(相当正常人体剂量的2倍)，每日1次，连续7天。雷尼组每只动物经体表面积换算后将雷尼替丁按0.0015g/(kg·d)溶于2mL生理盐水中灌胃(相当正常人体剂量的1倍)，每日1次，连续7天。正常组、模型组2mL生理盐水灌胃，每日1次，连续7天。
1.2.4 观察指标与检测方法①胃黏膜血流量(CMBF)探测：采用美国BIOPAC公司生产的多道生理记录仪激光多谱勒血流测试模块，选用迷你型接触式探头(型号为TS-D143)轻轻垂直接触胃黏膜表面，血流仪将采集到的信号由MP-150型模—数转换器转换成血流灌注量单位(bloodperfusion unit，BPU)BPU值为数码信号，其值输入计算机，采用该公司生产的配套软件(Acqknowledge V3.7.3)进行曲线的输出和记录。参数设置为：call imput volts为0，scal-ing value为O；cal2imput volts为10，scaling value为9999；1通道设为GMBF测量通道，5通道设为压力监测通道。
, 百拇医药
测量时先将各组大鼠均用10%乌拉坦(10mL/kg)腹腔注射，麻醉后快速将其背位固定，经剑突下正中切开腹壁，从腹腔中将胃轻轻拉出，暴露并固定胃部，于胃前壁大弯无血管区域作-0.5cm横行切口，沿胃大弯处剪开2cm，将激光探头先后置于胃小弯、胃大弯、胃窦和胃底4点检测，当显示器测量稳定后开始取值，每只大鼠每点各测3次，每次测15s，取稳定的曲线10s(根据5通道观测其是否稳定)算上述4处平均值进行统计学分析。
胃黏膜平均血流量值=(胃小弯GMBF值+胃大弯GMBF值+胃窦CMBF值+胃底GMBF值)/4
②胃黏膜损伤指数(UI)计分：取下胃后，沿大弯剪开胃壁使黏膜面外翻，用生理盐水轻轻漂洗，用毛笔轻轻刷去胃黏膜表面黏液，于手术弯盘中展开，于10倍放大镜下肉眼观察，仔细观察每只大鼠的胃黏膜损伤情况，按Guth标准详细记录胃黏膜溃疡指数(Ulcer Index，UI)：斑点糜烂计1分；糜烂长度4mm计5分；宽度>1mm时分值×2。
, 百拇医药
③胃黏膜组织形态学研究：实验结束后，无菌条件下在腺胃区黏膜损伤明显处，取0.5cm×1.0cm大小的组织块，生理盐水冲洗干净，将标本人10%甲醛固定24～48h，常规石腊包埋，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，切片厚4～5pm。苏木素-伊红染色(H-E染色)：二甲苯脱腊，无水乙醇洗腊，95%乙醇→80%乙醇→,70%乙醇→自来水冲洗→蒸馏水冲洗→入苏木素染液染色1～15min→水洗→盐酸乙醇分色→水洗→促兰(兰化)→入10%伊红水液染色5min→95%乙醇(I)分色脱水→95%乙醇(Ⅱ)分色脱水→无水乙醇(I)脱水一无水乙醇(Ⅱ)脱水→二甲苯透明一中性树胶封片。切片机切片：美国产820型AO切片机；显微观察：(江南光学集团xs-200型双目显微镜检查)在光镜下观察胃黏膜组织病理形态学改变。麦克奥迪显微镜行电脑图象摄像。
1.2.5 统计学方法所有数据均以均数和标准差(x±s)表示，组间比较若方差齐时选择LSD法，方差不齐时选择DunnettT3法进行方差分析和两两比较。所有数据均输入计算机，用SPSS软件进行处理(所有指标的统计学方法相同)。
2 结果与分析
2.1 胃黏膜损伤指数(UI)的影响
结果显示正常组较模型组UI明显减少(P, 百拇医药(林 辉)